Vaciado en placa

UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA

CENTRO UNIVERSITARIO DE CIENCIAS EXACTAS E INGENIERÍAS

DEPARTAMENTO DE FARMACOBIOLOGIA

ACADEMIA MICROBIOLOGIA

MICROBIOLOGIA GENERAL

MC. Luz Eduviges Garay Martínez

CICLO 2010-B

ROCIO VIANET BARAJAS GONZALEZ
CAROLINA ELIZABETH GOMEZ MARQUEZ
CANDY SEGUNDO GARCIA

Técnica de vaciado en placa.

Dentro del grupo de recuentos microbianos a base decultivos con formación de colonias, la técnica por vaciado en placa es la mas utilizada. La muestra en cantidades conocidas se deposita en cajas petri estériles, y se adiciona el medio de cultivo fundido a una temperatura de 45°C y se mezcla con la muestra.
Después de la incubación se cuentan las colonias desarrolladas las que multiplicadas por el inverso de la dilución que corresponda permiteestimar el número de microorganismos viable por gramo o mL de muestra, obviamente con las condiciones de prueba (medio de cultivo, condiciones fisicoquímicas y tipo de colonias contadas), el recuento obtenido se referirá a determinado grupo de microorganismos. Esta técnica permite la mayoría de las veces cuantificar la contaminación en alimentos, medicamentos.
Cuando se requiere investigar elcontenido de microorganismos viables en un alimento, la técnica comúnmente utilizada es la cuenta en placa.
En realidad esta técnica no pretende poner en evidencia todos los microorganismos presentes. La variedad de especies y tipos diferenciables por sus necesidades nutricionales, temperatura requerida para su crecimiento, oxígeno disponible, etc., hacen que el número de colonias contadas constituyanuna estimación de la cifra realmente presente y la misma refleja si el manejo sanitario del producto ha sido el adecuado.
Por otra parte el recuento de termofílicos, psicrofílicos y psicotróficos es importante para predecir la estabilidad del producto bajo diferentes condiciones de almacenamiento.
Para obtener resultados reproducibles y por lo tanto significativos, es de suma importancia seguirfielmente y controlar cuidadosamente las condiciones.
Esta técnica puede aplicarse para la estimación de microorganismos viables en una amplia variedad de alimentos.
El fundamento de la técnica consiste en contar las colonias, que se desarrollan en el medio de elección después de un cierto tiempo y temperatura de incubación, presuponiendo que cada colonia proviene de un microorganismo de lamuestra bajo estudio. El método admite numerosas fuentes de variación, algunas de ellas controlables, pero sujetas a la influencia de varios factores.
Procedimiento.
1. Distribuir las cajas estériles en la mesa de trabajo de manera que la inoculación; la adición de medio de cultivo y homogenización, se puedan realizar cómoda y libremente. Marcar las cajas en sus tapas con los datos pertinentespreviamente a su inoculación y correr por duplicado.
2. Después de inocular las diluciones de las muestras preparadas según la NOM-110-SSA1-1994, Preparación y Dilución de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico (Ver anexo al final del tema), en las cajas Petri, agregar de 12 a 15 ml del medio preparado, mezclarlo mediante 6 movimientos de derecha a izquierda, 6 en el sentido delas manecillas del reloj, 6 en sentido contrario y 6 de atrás a adelante, sobre una superficie lisa y horizontal hasta lograr una completa incorporación del inóculo en el medio; cuidar que el medio no moje la cubierta de las cajas. Dejar solidificar.
3. Incluir una caja sin inóculo por cada lote de medio y diluyente preparado como testigo de esterilidad.
4. El tiempo transcurrido desde elmomento en que la muestra se incorpora al diluyente hasta que finalmente se adiciona el medio de cultivo a las cajas, no debe exceder de 20 minutos.
5. Incubar las cajas en posición invertida (la tapa hacia abajo) por el tiempo y la temperatura que se requieran, según el tipo de alimento y microorganismo de que se trate.

Cálculo del método.
* Después de la incubación, contar las...