Venopuncion

25. Perfil lipídico
Isaac Túnez Fiñana1, Aurora Galván Cejudo2
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Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Avda. Menéndez Pidal s/n, 14071Córdoba, 2Campus de Rabanales, Edif. Severo Ochoa 14071-Córdoba

RESUMEN La cuantificación de colesterol y triglicéridos en suero es un procedimiento analítico básico en el diagnóstico y seguimiento de enfermedades metabólicas, primarias osecundarias. Altos niveles de colesterol se asocian a riesgo de padecer enfermedades cardiovasculares. En esta práctica se realizará la determinación en suero de colesterol total, colesterol-HDL y triglicéridos. Palabras claves: colesterol, lipoproteínas, triglicéridos Abreviaturas: 4-AP: 4-amino fenazona, CHE: colesterol estearasa, CHOD: colesterol oxidasa, GK: Glicerol Kinasa, GPOD: Glicerolfosfatooxidasa, HDL: lipoproteínas de alta densidad, LDL: lipoproteínas de baja densidad, POD: peroxidasa, VLDL: liproproteínas de muy baja densidad

1. INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS El perfil lipídico lo constituye la cuantificación analítica de una serie de lípidos que son transportados en la sangre por los diferentes tipos de lipoproteínas plasmáticas. La determinación de estos parámetros es unprocedimiento analítico básico para el diagnóstico y seguimiento de enfermedades metabólicas, primarias o secundarias. Entre estos parámetros analíticos que se pueden determinar están: el colesterol total, el colesterol transportado por las LDL, el colesterol transportado por las HDL, los triglicéridos totales, ciertas apoproteínas particulares etc. Altos niveles de colesterol se asocian a riesgo de padecerenfermedades cardiovasculares, en especial aquel unido a las LDL (colesterol malo). El colesterol de las HDL (colesterol bueno), puesto que representa aquella fracción de colesterol que se transporta al hígado para su metabilización y excreción por vía biliar, no se asocia con riesgo de enfermedad. Los objetivos de la práctica son la determinación en suero de colesterol total, HDL-Colesterol ytriglicéridos, para lo que se utilizarán kits comerciales.

1.1. Determinación de colesterol total

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Para la determinación de colesterol total se utilizan reactivos comerciales que incluyen las enzimas y sustratos necesarios para la cuantificación de todas las formas de colesterol presentes en el suero (Kit comercial de LinearChemicals). Las reacciones que tienen lugar son:
Esteres decolesterol + H2O CHE → Colesterol + Ac. Grasos

Colesterol + O2 + H2O

CHOD → Colestenona + H2O2 POD → Quinona + H2O

H2O2 + Fenol + 4-AP

1. Una colesterol estearasa (CHE) hidroliza los ésteres de colesterol a colesterol mas ácidos grasos libre. 2. A continuación una colesterol oxidasa (CHOD) oxida todo el colesterol a colestenona y peróxido de hidrógeno. 3. El peróxido de hidrógeno es sustratode una peroxidasa (POD) que junto con 4-amino fenazona (4-AP) da lugar a la formación de una quinona roja. La quinona formada es proporcional a la concentración de colesterol en la muestra.

1.2. Determinación de HDL-colesterol Para la determinación del colesterol presente en las principales lipoproteínas que lo contienen como HDL (lipoproteínas de alta densidad) y LDL (lipoproteínas de bajadensidad), es necesario: Primero, la separación selectiva de la lipoproteína correspondiente con agentes precipitantes. Segundo, la cuantificación del colesterol presente en dicha lipoproteína como se indicó anteriormente. Entre estos reactivos precipitantes están el ácido fosfotungstico y magnesio que precipitan a las LDL y VLDL (lipoproteínas de muy baja densidad) mientras que las HDL permanecenen solución.

1.3. Determinación de triglicéridos Para la determinación de triglicéridos en suero se utilizan reactivos comerciales (Kit comercial de LinearChemicals) que incluyen las enzimas y sustratos necesarios para la cuantificación por espectrofotometría visible. Las reacciones que tienen lugar son:
Triglicéridos + H2O Lipasa → 2 Glicerol + Ac. Grasos

Glicerol + ATP

GK → GPOD →...