e.coli

Manual de Procedimientos “Detección de STEC O157 en alimentos”

Manual de Procedimientos
Diagnóstico y caracterización de
Escherichia coli O157
productor de toxina Shiga
a partir de alimentos

2008

Manual de Procedimientos “Detección de STEC O157 en alimentos”

AUTORES

Marta Rivas
Gerardo Leotta
Isabel Chinen

Departamento Bacteriología
Instituto Nacional de EnfermedadesInfecciosas
A.N.L.I.S. “Dr. Carlos G. Malbrán”
Centro Regional de Referencia del WHO Global Salm Surv
para América del Sur

Manual de Procedimientos “Detección de STEC O157 en alimentos”

INDICE
CAPITULO I - INTRODUCCION
1.1.- Enfermedades Transmitidas por Alimentos
1.2.- Escherichia coli
1.3.- Marcadores de Virulencia
1.4.- Evolución de Escherichia coli O157:H7
1.5.- Patogénesis
1.6.-Manifestaciones clínicas
1.7.- Reservorios y vías de transmisión
1.8.- Tratamiento
1.9.- Prevención
1.10.- Epidemiología
1.11.- Situación actual del SUH en Argentina
1.12.- Vigilancia del SUH en Argentina y Latinoamérica

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CAPITULO II - AISLAMIENTO DE STEC O157:H7 y O157:NM A PARTIR DE ALIMENTO
METODO A para el aislamiento de STECO157:H7/NM (basado en USDA/FSIS)
2.1.- Etapa de enriquecimiento
2.2.- Tamizaje
2.2.1.- Inmunocromatografía
2.2.2.- Enzimoinmunoensayos (EIA)
2.2.3.- PCR
2.3.- Separación inmunomagnética
2.4.- Aislamiento
2.4.1.- Medios selectivos
2.4.2.- Medios cromogénicos
2.4.3.- Medios fluorogénicos
2.5.- Identificación y caracterización de los aislamientos
Procedimiento microbiológico para el aislamientode STEC O157:H7/NM
FIGURAS

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CAPITULO III - REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)
3.1.- Fundamento
3.2.- Equipos, materiales y reactivos
3.3.- Preparación de la muestra
3.4.- Preparación de la mezcla de reacción
3.5.- Carga de los templados y amplificación
3.6.- Detección del producto de amplificación
3.7.- PCR MK para ladetección de los genes stx1 y stx2
3.8.- PCR múltiple para la detección de los genes stx1, stx2 y rfbO157

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CAPITULO IV - IDENTIFICACION Y CARACTERIZACION DE STEC
4.1.- Identificación bioquímica
4.1.1.- Esquema para diferenciar E. coli, E. coli O157:H7/NM y E. hermanii
4.1.2.- Esquema mínimo para diferenciar E. coli y E. hermanii
4.1.3.- Biotipificación deE. coli O157:H7
4.1.4.- Caracterización de cepas productoras de enterohemolisina
4.2.- Sensibilidad a los antimicrobianos
4.3.- Serotipificación
4.3.1.- Detección del antígeno somático O
4.3.2.- Detección del antígeno flagelar H
4.4.- Detección de factores de virulencia por PCR
4.4.1.- Detección del antígeno flagelar H7
4.4.2.- Enterohemolisina (EHEC-hly)
4.4.3.- Factor eae

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CAPITULO V - CONFIRMACION DE Escherichia coli PRODUCTOR DE TOXINA SHIGA
5.1.- Ensayo de citotoxicidad específica en células VERO
5.1.1.- Preparación de la muestra
5.1.2.- Ensayo de citotoxicidad
5.1.3.- Titulación de la actividad citotóxica de las cepas Stx positivas
5.2.- Ensayode inmunocromatografía para la detección de toxinas Shiga 1 y 2
5.3.- Ensayo de aglutinación reversa pasiva (RPLA) para detección de toxinas Shiga

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REFERENCIAS

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ANEXO I - MEDIOS Y REACTIVOS

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ANEXO II - FIGURAS

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ANEXO III - CAA / ARTÍCULOS MODIFICADOS

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CAPITULOI – INTRODUCCION

1.1.- Enfermedades Transmitidas por Alimentos

En el siglo XXI, las enfermedades transmitidas por alimentos (ETA) siguen constituyendo
uno de los principales desafíos para la Salud Pública. El desarrollo de estrategias de
prevención y control requiere un trabajo colaborativo entre el campo de la medicina humana y
veterinaria, los organismos reguladores de la producción,...