actividad enzimatica de la beta galactosidasa a ph6,0 y 30ºC


PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATÓLICA DE VALPARAÍSO
FACULTAD DE INGENIERÍA
ESCUELA DE INGENIERÍA BIOQUÍMICA




IEB-359 LABORATORIO DE BIOCATÁLISIS
CINÉTICA DE FERMENTACIÓN





Resumen
Como ingenieros en Bioprocesos, irremediablemente llegamos a enfrentarnos con el montaje de técnicas que nos permitan analizar las muestrasresultantes de los experimentos que realizamos, y poder así generar las conclusiones adecuadas a ese aspecto. Ya sea para generar nuevos productos, servicios, y el mejoramiento de ellos.
En el laboratorio de Biocatálisis se utilizó la Kluyveromices Marcianus que es un tipo de levadura utilizado industrialmente en la fabricación de pan, cerveza y vino. Se divide por yemación y produce la enzimaLactasa la cual hidroliza a la Lactosa (nuestro sustrato) en Glucosa y Galactosa, las cuales son sacáridos y azucares reductores a la vez. Este microrganismo necesita condiciones mínimas para su desarrollo tanto en temperatura = 30°c y PH=4,5.
En la experiencia se montó una práctica en la que se requería conocer el comportamiento de la levadura durante la fermentación aerobia, con respecto a sucrecimiento y consumo de sustrato.
Lo primero que se elaboro fue la curva de calibrado para la biomasa y para el sustrato.
Para determinar la curva de biomasa se utilizaron dos técnicas que son el método del peso seco y turbidimetría (a 650nm) en donde se obtuvo la siguiente curva: XXXXXXXXXXX.
Y para determinar la curva del azúcar reductor se utilizó el método del Ácido dinitrosalicílico (DNS) yse cuantificaba la muestra en un espectrofotómetro a 540 nm, se obtuvo la siguiente curva: xxxxxxxxxxxxxxxx
Lo segundo fue preparar el medio de cultivo para 200ml y un crecimiento máximo de 2 g/l de biomasa el cual contenía sales (sulfato de amonio, fosfato acido de potasio y sulfato de magnesio), lactosa como nutriente limitante, extracto de levadura la cual proporciona proteínas, hidratos decarbono, aminoaciodos y minerales y un tampón citrato de PH=4,7.
Lo tercero y último que se realizo fue la cinética de la levadura, tomando muestras cada 45 minutos y manteniendo al microrganismo a 30°C, PH=4,5 y 200 rpm. Con ellos se obtuvieron los siguientes resultados:
U= xxxxxxxxxx ; Rendimiento Y x/s = xxxxxxxx ; tiempo de duplicación: XXXX
Aquí van las conclusiones.




Índice
1.Resultados y discusión
1.1 Elaboración de curvas de calibrado
1.1.1 Curva de calibrado de azúcar reductor
1.1.2 Curva de calibrado de biomasa
1.2 Preparación del medio de cultivo
1.3 Cinética del microorganismo en un matraz
2. Conclusiones
3. Bibliografía
4. Anexo

















1. Resultados y discusión
1.1 Elaboración de curvas de calibrado

1.1.1 Curva decalibrado de azúcar reductor
Se dispuso de un set de 6 tubos de ensayo, en donde se prepararon soluciones de lactosa a concentraciones entre 0,2 y 2 g/L, para ello se entregó una solución Stock de lactosa de 2 g/L. Luego se dispuso de un set de 7 tubos de ensayo a los cuales se les adiciono 1 ml de solución de lactosa, a distintas concentraciones en el rango antes mencionado, y 1 ml de reactivo DNSsumado a un blanco elaborado con un 1ml de agua destilada y 1 ml de reactivo DNS. Este conjunto de tubos fue llevado a un baño de ebullición con el propósito de obtener un cambio de coloración en el reactivo DNS en presencia del grupo reductor de la lactosa. Una vez transcurridos 15 minutos se retiran del baño a ebullición y se pasan a enfrían en un baño de hielo para poder detener la reacción. Porúltimo, pasados unos 3 minutos y una vez ya enfriadas las muestras se les agrega 10 ml de agua destilada, se homogenizan y se lee la absorbancia de cada concentración en un espectrofotómetro a 540 nm. Cabe mencionar que este procedimiento se realizó por duplicado.
Figura 1.1.1.1: Datos obtenidos experimentalmente1 para curva de calibrado de Lactosa.
Curva de Calibrado para lactosa, bajo el...