bacterias

Guía de trabajo práctico: Identificación de Staphylococcus

GENERALIDADES: Los staphylococcus son células esféricas Gram positivas por lo general dispuestas en racimos irregulares parecidos a las uvas, algunos son miembros de la micro flora normal de la piel y las mucosas del ser humano y no son patógenos.
Los staphylococcus patógenos suelen producir hemolisis, coagular el plasma y producirdiversas enzimas y toxinas extracelulares, gracias a estas toxinas se basa la identificación y/o diagnóstico de esta bacteria que es de mucho interés clínico.

Identificación morfológica de Staphylococcus.
En l884 un científico llamado Cristhian Gram descubrió un método de identificación morfológica de todas clases de bacterias sean positivas o negativas para poder observar en el microscopioconvencional. Este método se le denomina COLORACION DE GRAM; la cual se emplea un kit de sustancias químicas ya sea orgánicas o sintéticas que coloran o tiñen la pared celular de las bacterias de un color morado o violeta para las Gram positivas y/o de rosado para las Gram negativas.
TINCION DE GRAM: materiales.

CRISTAL VIOLETA: colorante primario
LUGOL (YODO): actúa como mordiente
ALCOHOLACETONA: decolorante
SAFRANINA: colorante de contraste


APLICACIÓN: cuando se tiene la placa con el microorganismo fijado (solución salina) se procede a la tinción con el kit de colorantes procediendo de la siguiente manera:


1. Se agrega el colorante primario que es el CRISTAL VIOLETA a la placa cubriendo todo el perímetro de donde se encuentra el microorganismo fijado por un tiempode un (1) minuto.
2. Luego de lavar el cristal violeta, se agrega el LUGOL a la placa cubriendo todo el perímetro de donde se encuentra el microorganismo fijado por un tiempo de un (1) minuto.
3. Luego de lavar el lugol, se agrega el ALCOHOL ACETONA a la placa cubriendo todo el perímetro de donde se encuentra el microorganismo fijado por un tempo de (30) segundos.
4. Luego de lavar el alcohol,se agrega el colorante de contraste que es la SAFRANINA a la placa cubriendo todo el perímetro de donde se encuentra el microorganismo fijado por un tiempo de un (30) segundos.
5. Finalmente se lava la placa y de deja cerca al mechero para que seca el sobrante de agua que queda en esta y se observa al microscopio.


Aislamiento de un Staphylococcus

METODO DE SIEMBRA:

El primer paso aconseguir la identificación de un microorganismo es proceder a su obtención en cultivo puro, pues es obvio que las reacciones de cultivos mixtos no podrán ser usadas en la identificación. Existen varios métodos de siembra para un staphylococcus pero el método más común para la obtención de un cultivo puro es por medio de la siembra por agotamiento en el agar sangre ya que en este agar evidenciamos deprimera la B-hemolisis que es característica propia de este microorganismo.

SIEMBRA POR AGOTAMIENTO: La finalidad de esta siembra es obtener colonias aisladas del microorganismo o microorganismos sobre el medio de cultivo sólido. Consiste en desplazar el asa de platino sobre la superficie del medio sólido siguiendo EL siguiente procedimiento:

En zig-zag: consiste en desplazar el asa por elmedio haciendo un movimiento en forma de zeta desde un borde de la placa hacia el opuesto. Cuando se llega al centro de la placa, se levanta el asa y se repite el movimiento empezando por el otro extremo de la misma (figura anexa). Este tipo de siembra también se puede hacer en tubo con medio sólido en pico de flauta.



IDENTIFICION DE STAPHYLOCOCCUS POR MEDIO DE PRUEBAS BIOQUIMICASDetermina la actividad específica del microorganismo por sus reacciones según la observación en las diferentes pruebas como son: LA CATALASA, COAGULASA, DNasa, y MANITOL.

APLICACIÓN: luego de tener el microorganismo puro del resultado de un aislamiento perfecto se procede hacer las respectivas pruebas para identificar que especie de staphylococcus se tiene ya que hay tres tipos de especie distintas...