Bioquimica

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIRIQUÍ



FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS



ESCUELA DE QUÍMICA



INFORME DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA


INHIBICIÓN ENZIMÁTICA DE LA DESHIDROGENASA SUCCINICA DEL HIGADO.

ESTUDIANTES:
DANIEL BEJERANO 4-777-1401
REINA RÍOS 4- 751-1141
KATHERIN MIRANDA 4-753-2207.



PROFESORA: ALBERTINA MONTENEGRO




FECHA DE ENTREGA:24/05/2012.













INHIBICIÓN ENZIMÁTICA DE LA DESHIDROGENASA SUCCINICA DEL HIGADO.
17 DE MAYO DE 2012.



I. Objetivos:

o Determinar la actividad enzimática del succinato deshidrogenasa en la fracción mitocondrial del hígado en presencia y ausencia de un inhibidor competitivo de la enzima.

o Determinar los parámetros cinéticos de la enzima.




II.Marco Teórico:




Los inhibidores enzimáticos son moléculas que se unen a enzimas y disminuyen su actividad. Puesto que el bloqueo de una enzima puede matar a un organismo patógeno o corregir un desequilibrio metabólico, muchos medicamentos actúan como inhibidores enzimáticos. También son usados como herbicidas y pesticidas. Sin embargo, no todas las moléculas que se unen a las enzimasson inhibidores; los activadores enzimáticos se unen a las enzimas e incrementan su actividad.1 Excluyéndose de ésta categoría aquellos agentes como los ácidos fuertes, alcoholes y calor que producen alteraciones en la estructura espacial de la molécula proteica que conduce a la desnaturalización. La union de un inhibidor puede impedir la entrada del sustrato al sitio activo de la enzima oobstaculizar que la enzima catalice su reacción correspondiente. La unión del inhibidor puede ser reversible o irreversible. Normalmente, los inhibidores irreversibles reaccionan con la enzima de forma covalente y modifican su estructura química a nivel de residuos esenciales de los aminoácidos necesarios para la actividad enzimática. En cambio, los inhibidores reversibles se unen a laenzima de forma no covalente, dando lugar a diferentes tipos de inhibiciones, dependiendo de si el inhibidor se une a la enzima, al complejo enzima-sustrato o a ambos.2
La deshidrogenasa succínica es una enzima especial de la mitocondria, porque participa en dos procesos metabólicos a la vez, el ciclo de Krebs y la cadena de transporte electrónico. En el ciclo de Krebs, la enzima convierte enfumarato en presencia de FAD como coenzima. Con este cambio del indicador redox se comprueba que la enzima está transformando el sustrato. 3
Este proceso es inhibido en forma competitiva con la presencia de otros ácidos dicarboxílicos como el malonato, malato, oxalacético y oxálico, los cuales se unen fuertemente al sitio activo de la enzima, lo que genera la acumulación de succinato. Elproceso se puede evidenciar in vitro mediante el uso de un aceptor electrónico artificial como el azul de metileno, que es coloreado cuando se encuentra oxidado e incoloro cuando se reduce en la medida en que se reoxida la coenzima FAD.

III. Materiales y Reactivos:
• Tubos de Ensayos.
• Vaso Químico de 100, 250 y 500 mL.
• Micropipetas de 1000 y 50 microlitros.
•Gradilla.
• Plancha.
• Gotero.


Reactivos:

|Fosfato de Sodio Monobásico |
|PESO MOLECULAR : 137,99 |
|Formula: NaH2PO4·H2O|
|- TEMPERATURA DE FUSIÓN: 100ºC |
|ESTADO FÍSICO, COLOR Y OLOR: Sólido, Polvo Cristalino, ligeramente higroscópico sin olor. |
|SOLUBILIDAD EN AGUA, g/ml: 427 gr / 100 ml @ 100ºC...