Carlos Y Cristina

Cultivo de células
epiteliales mamarias
humanas
CULTIVOS CELULARES

Carlos Bravo Buitrago, Cristina Masegosa Pérez
UNIVERSIDAD CATÓLICA DE VALENCIA | 3º BIOTECNOLOGÍA

CULTIVO DE CÉLULAS EPITELIALES MAMARIAS
HUMANAS
Carlos Bravo Buitrago1, Cristina Masegosa Pérez2
1,2 Universidad Católica de Valencia

Abstract
Aquí os proporcionamos un protocolo sobre el cultivo de células epiteliales mamariashumanas. Hemos seleccionado el tejido a partir de mamoplastia de reducción pero
también podríamos haberlo hecho sobre células encontradas en la leche materna
(tratándolas de diferente forma). Antes de realizar el cultivo primario en sí os describimos
los pasos a llevar a cabo para realizar el procesamiento de la muestra, en la que hicimos
una digestión del tejido con una solución enzimática, unafiltración de los organoides y
posteriormente una siembra. Después de esto se procede a su congelación, y cuando
queramos podemos proceder a realizar el cultivo. El cultivo primario se llevó a cabo en
medio MCDB 170 (medio basal nutritivo utilizado para el crecimiento de las células
epiteliales mamarias, el cual se complementa con factores de crecimiento o suero de
ternera fetal). Ademásprocedimos a la caracterización y diferenciación de los fenotipos
de las células mediante inmunohistoquímica.

Una de las principales ventajas del cultivo de células epiteliales mamarias de humano
(HMEC) es que, a diferencia de la mayoría de los otros sistemas de órganos humanos, es
fácil obtener tejidos de la mama con contenido en células epiteliales normales en
individuos sanos. Las operaciones demamoplastia de reducción, que se realizan
normalmente sobre todo en los individuos más jóvenes, la producción de abundantes
cantidades de HMEC. Además, los fluidos de lactancia proporcionan otra fuente de fácil
disponibilidad de cantidades más pequeñas de HMEC en un estado más diferenciado. Las
principales dificultades encontradas en el desarrollo de sistemas de cultivo para HMEC
normales surgen deser la mama de un tejido arquitectónicamente complejo que contiene
varios tipos de células epiteliales y no epiteliales y del hecho de que la mama puede
someterse a múltiples estados de diferenciación en diferentes momentos.
Existen dificultades para distinguir entre los principales tipos de células epiteliales
(luminales y basales), la interrelación entre estos tipos, y para determinar qué tiposde
células están proliferando en el sistema de cultivo. Además, in vivo, las células epiteliales
mamarias normalmente interactúan con otros tipos de células (por ejemplo, fibroblastos,
endoteliales vasculares, y adiposo), así como componentes de la matriz celular, dentro de
una arquitectura tridimensional. La mayoría de los sistemas de cultivo no presentan esta
complejidad. Las célulasepiteliales basales alinean el exterior de los conductos,
descansando sobre la membrana basal. Hasta en la capa basal son células mioepiteliales,
que contienen músculo como miofilamentos y que la contracción por los estímulos
hormonales provoca la expulsión de la leche. Las células luminales se encuentran en la

parte superior de la capa basal, aunque también pueden tener contacto directo con la
membranabasal. In vivo, exhiben una morfología polarizada, con microvellosidades en
el lado luminal. Otras dimensiones de la complejidad se añaden por la topografía. Las
células en los conductos grandes se muestran diferentes en la estructura y en la función
en comparación con las encontradas en los conductos más pequeños y en las unidades
lobulares ductales terminales (TDLU).
A diferencia de la mayoríadel resto de sistemas de órganos, la glándula mamaria de
adultos no se encuentra en un estado de diferenciación celular, como sería durante el
embarazo, la lactancia o en la involución. Aparte de las células obtenidas a partir de
fluidos de la lactancia, los tejidos mamarios humanos no se encuentran disponibles
fácilmente a partir de las glándulas diferenciadas, por lo que el análisis de la...