Clase Capitulo III Cromatografia TLC 2015 1

CROMATOGRAFIA

Las fases cromatográficas son dos:
La fase móvil: que fluye a través de una fase
estacionaria, arrastrando con ella a los
compuestos de la mezcla.
La fase estacionaria: en la cual están retenidos
los componentes de la muestra, y a través de la
cual fluye la fase móvil arrastrando a los
mismos.

En el equilibrio
- Pueden regir procesos de reparto ó procesos de
adsorción. (enalgunos casos ambos coexisten)
- Reparto, los componentes de la mezcla a separar
tienen un coeficiente de partición característico que
determinará el reparto de dicho compuesto en ambas
fases.
- Adsorción, una determinada especie química es
retenida en los sitios activos de la superficie de un
sólido.

Cromatografía de REPARTO
Separación de las moléculas por diferencias de
distribución (K)
AnalitoFuerzas de transmisión

FM

Fuerzas de retardo

FE

El sistema consta de dos componentes distinguibles: FE y FM en
éste sistema se colocan las moléculas separándose según el
resultado de una serie de equilibrios, entre las fuerza de
transmisión y las de retardo. La distribución esta dada por el k

El coeficiente de partición (k) depende de:
• Estructura del analito (A)
• Naturaleza química de lasdos fases
• Temperatura
• pH

K = [A] FE
[A] FM

F.M.

Compuestos a separar

F.E.

Los componentes de la muestra se distribuyen entre la fase
estacionaria y la móvil. Si un componente está la mayor
parte del tiempo en la fase móvil el compuesto se mueve
rápidamente, mientras que si se encuentra la mayor parte
en la fase estacionaria, el compuesto queda retenido y su
salida es mucho más lenta.
Deesta manera se produce la separación

Clasificación de los métodos cromatográficos
En Papel

ParticiónReparto

TLC
HPLC
GLC

Adsorción

Cromatografía

TLC
HPLC
GSC

Exclusión

Tradicional
HPLC

Intercambio
Iónico

Tradicional

afinidad

Tradicional

HPLC

HPLC

Cuales son las cromatografias de reparto?
Cromatografía en Papel
Líquidas

Cromatografía en capa fina
Cromatografía en columnaCromatografía de Gases

F.E.= Sorbente
Terminología

F.M.= Disolvente
Analito= Soluto

Cromatografia en Capa Fina
• Herramienta de análisis
rápida y eficiente (monitoreo)
• Purificación y aislamiento
• Cuantificación
• Se desarrollo por la
necesidad de separar
moléculas no polares (ej:
lipidos)

Cromatografía en Capa Fina-Consideraciones Generales



Soporte - FE: lámina de sorbente sobre placa devidrio, plástico o
aluminio (Sílica gel, óxido de aluminio, tierra de diatomeas,
poliestireno, politetrafluoretileno, sílica modificada- C8- C18- aminociano- etc)



Fases móviles: se deben elegir sistemas de solventes poco complejos
en su composición, con mínima sensibilidad a la temperatura y que
generen suficiente separación de los constituyentes de la muestra.



Mecanismos de separación:fenómenos de partición-adsorción.



Siembra: Para obtener bandas o manchas bien definidas debe
aplicarse sobre el cromatograma la mínima cantidad posible de
material.

Cromatografia en Capa Fina
Fundamento de la Separacón


Fuerzas de Van der Walls



Puentes Hidrógeno

VENTAJAS DE LA TLC


Requiere equipamiento simple y de bajo costo



Mayor resolución que cromatografía en papel
(manchas maspequeñas y definidas, partículas finas,
mayor superficie activa)



Mayor velocidad de separación



Tiene gran sensibilidad. Fácil detección. Requiere
poca cantidad de muestra y de solvente.



Fácil comprensión y ejecución



Se obtienen resultados en muy corto tiempo es
reproducible y versátil



Puede
obtenerse
información
cuali,
cuantitativa de los principales compuestos.



Fácilaislamiento



El fingerprint (huella digital) puede ser documentado.

semi

y

Pasos en la realización de la
Cromatografia en Capa Fina
• Aplicación de extracto y patrones o
estandares
• Desarrollo en cuba cromatográfica
• Secado del solvente
• Revelado
• Recuperación

Cromatografía en Capa Fina-Consideraciones generales


Siembra:
– Pequeño volumen
– Punto de origen
– Estándares



Desarrollo:
–...