coenzimas

CROMATOGRAFÍA IÓNICA

Definición de cromatografía:

Técnica física de separación basada en la distribución de solutos entre una fase móvil y una fase estacionaria. La cromatografía iónica se basa en el uso de una resina de intercambio iónico como fase estacionaria.

Para qué se usa

Convendría decir que la cromatografía iónica tiene un ámbito de aplicación que engloba a los estudios enlos que intervienen moléculas con peso molecular menor a 500.

Se usa para realizar un análisis completo de los iones que pueda haber presente en una determinada muestra.

Resina de intercambio iónico

Retención

La separación de los distintos iones se realiza por medio de una columna de intercambio iónico, la carga de la matriz de la columna (fase estacionaria) así como de la fasemóvil dependerá del pH y de la fuerza iónica, que es proporcional a la concentración de iones. Para unas condiciones determinadas serán retenidas en la columna los iones que tengan una carga complementaria a la de la fase estacionaria (los iones cargados negativamente serán retenidas por una matriz cargada positivamente), siendo eluidos los restantes.


La composición de las resinas puede servariada. Los intercambiadores iónicos de poliestireno son tan grandes que las macromoléculas muy cargadas, como las proteínas, se pueden enlazar irreversiblemente a ellos. Los de celulosa y dextranos sirven para intercambio iónico de macromoléculas. Los geles de intercambio iónico se usan en el caso de moléculas grandes (proteínas y ácidos nucleicos). Cuando las separaciones exigen condicionesquímicas fuertes se emplean intercambiadores iónicos inorgánicos.

Para generalizar podemos decir que la separación en estas resinas se basa en la adsorción reversible de moléculas de soluto cargadas a grupos de intercambio iónicos de carga opuesta inmovilizados en la resina.

El intercambio iónico al igual que cualquier proceso iónico es un equilibrio. El soluto cargado se une al intercambiadorcon carga opuesta mediante fuerzas electrostáticas.

Los intercambiadores cargados positivamente se unen a contraiones negativos, por lo que se llaman intercambiadores aniónicos, en los cargados negativamente pasa lo contrario.
R   P +

La molécula unida al intercambiador puede ser rápidamente reemplazada por otro ión:
R  P + + Na+  R  Na + + P+

Los métodos de hacer quese sientan atraídos en mayor medida unos iones u otros consisten en variaciones en el pH y la fuerza iónica de la resina, como fue indicado anteriormente.

La capacidad de un intercambiador es una medida cuantitativa de la habilidad para aceptar contraiones cambiantes, se puede expresar como:

Capacidad total: número de grupos sustituyentes cargados por unidad de gramo de intercambiador secoo ml de intercambiador húmedo.

Capacidad disponible: Cantidad de analitos que pueden unirse a un intercambiador iónico en las condiciones de trabajo.

Elución

Si las sustancias no deseadas son las que se unen a la columna no es necesario realizar un cambio en las condiciones de elución, ya que la sustancia de interés sale en el percolado. Tampoco hace falta realizar cambios cuando loscomponentes de la muestra se retardan de forma diferencial y pueden separarse en las condiciones de inicio.

Sin embargo normalmente los compuestos se separan por elución por gradiente, que consiste en variar la carga iónica del solvente o su pH de forma que se alcance el punto isoeléctrico del ión de interés o el de la matriz, neutralizando de este modo la fuerza que los retiene en la columna ypermitiendo que la abandonen.

Hay que tener precaución con aquellas sustancias que presentan una solubilidad mínima en el punto isoeléctrico para evitar que se produzca precipitación en la columna.
A baja fuerza iónica la competencia por los grupos cargados de la matriz es mínima y las sustancias cargadas pueden unirse fuertemente, al aumentar la fuerza iónica del medio la competencia...