Cromatografia En Columna

Cromatografía en columna (C.C.)

Natalia Restrepo Mesa
Cód. 1094900913

M.Sc. Fernando Agudelo Aguirre

Resumen
En esta Práctica se ha realizado la separación de una mezcla equivalente de dos colorantes. Conocidos por su nombre común son el cristal violeta y el segundo naranja de metilo. Colorantes polares pero el primero mucho más que el otro. Se procedió realizándose dos elucionesaumentando la polaridad en la segunda elución. En la primera elución se uso etanol y el colorante que salió primero fue el naranja de metilo como era de esperarse. Luego se uso una mezcla de etanol/dietilamina 9:1 como eluyente pero esta vez el desarrollo de la cromatografía fue lento. La sílice gel retenía el cristal violeta por tanto la recolección de este fue tediosa.

Objetivos
* Conocerla técnica de cromatografía en columna, sus características y los factores que en ella intervienen.
* Utilizar la cromatografía en columna para la separación de mezclas de compuestos orgánicos.
* Controlar por cromatografía en capa fina la separación de una mezcla de compuestos por cromatografía en columna.

Introducción
Las cromatografías son un grupo de técnicas de separaciónselectiva de moléculas, en las que los componentes de una mezcla compleja de componentes pueden ser identificados y/o purificados. Existen varios tipos de cromatografías,

según los criterios que se usan para hacer los análisis, pero todas consisten de una fase estacionaria y una móvil.

En la cromatografía de columna las moléculas de una mezcla son separadas en base a la afinidad de las moléculaspor la fase estacionaria o por la fase móvil. Si una molécula A tiene más afinidad por la fase estacionaria que la B, B bajará más rápido que A.

La cromatografía en columna se emplea para la separación de mezclas o purificación de sustancias a escala preparativa. Como fase estacionaria se usa, generalmente, gel de sílice o alúmina dentro de una columna. La elección del disolvente es crucialpara una buena separación. Dicho disolvente pasa a través de la columna por efecto de la gravedad o bien por aplicación de presión (cromatografía flash). La columna se prepara mezclando el soporte con disolvente y se rellena la columna poniendo en el fondo de ésta un poco de algodón o lana de vidrio, para evitar que la sílica o la alúmina queden retenidas en la columna y que el disolvente seengrasada hasta el nivel del soporte. A continuación se introduce la muestra por la parte superior de la columna y se eluye con el disolvente elegido, recogiéndose por lo general en tubos de ensayo.

Una columna de cromatografía es un tubo de vidrio relleno con una sustancia sólida de propiedades adsorbentes constituida por pequeñas partículas: gel de sílice y alúmina son las más usadas. Este rellenoes lo que se conoce en cromatografía como la fase estacionaria. A través de la columna se hará pasar una corriente de un disolvente o mezcla de disolventes denominada eluyente y/o fase móvil.

La mezcla de compuestos a separar se disuelve en una pequeña cantidad de disolvente y se coloca sobre el adsorbente, en la parte superior de la columna, quedando adsorbida por el mismo. A continuaciónse pasa un flujo de eluyente a través de la columna. Los compuestos constituyentes de la mezcla son arrastrados por el eluyente a su paso, haciéndoles avanzar a lo largo de la columna. Sin embargo, no todos los compuestos avanzan a la misma velocidad, y esta es precisamente la clave de la cromatografía. Algunos compuestos se ven más fuertemente retenidos por el adsorbente (fase estacionaria) ypor lo tanto avanzarán más despacio. Por el contrario, otros apenas son retenidos y avanzarán a mayor velocidad.

Métodologia
Con una bureta de 25mL se realizo un montaje de cromatografía en columna flash (Fig. 1). Introduciendo un pequeño copo de algodón en su extremo inferior y pasando aire a presión para acelerar el proceso. Primero se preparo una suspensión con 5g de gel de sílice 0,2 mm...