Diluciones

Introducción a la Biología Celular y Molecular

TP1: Diluciones
Objetivos
? Familiarizarse con las unidades mas utilizadas en biología molecular y ser capaces de
intercambiar ágilmente las distintas unidades.
? Familiarizarse con el material de uso corriente en el laboratorio, la preparación de soluciones y
el empleo de diluciones a partir de soluciones concentradas

IntroducciónDiluciones
Cuando una solución es de uso corriente en un laboratorio, se suele preparar una solución
madre o stock, que se encuentra en una concentración mayor de la que se utiliza. A partir de
ésta, se realiza una dilución para preparar la solución a la concentración de uso.
Se dice que una solución es “NX” (se lee “n por”) cuando esta concentrada N veces
respecto de la de uso corriente.
Ej.:“PBS 5X” (PBS cinco por) es una solución stock de PBS 5 veces más concentrada que
el PBS de uso normal. La solución de uso normal sería 1X. Puede prepararse PBS 1X haciendo
una dilución 1/5 de la solución stock (para 1000 ml de PBS 1X deben utilizarse 200 ml PBS stock
5X y agregar H2O bidestilada hasta llevar la solución a 1000 ml de volumen final).
Otro ejemplo: Si tenemos una solución 10X cuyaconcentración molar es 5 M, la solución
de uso normal es 0.5 M (es decir diez veces más diluida).
A veces es necesario diluir “mucho” una solución concentrada (Ej: 1/1000, 1/1000000). En
estos casos se suelen hacer diluciones sucesivas que se denominan diluciones seriadas, para
disminuir los errores de medición al pipetear volúmenes muy pequeños.
Ejemplo.: Preparar 1 ml de una solución de unanticuerpo que contenga 0.1 µg/ml
(microgramo/mililitro=106 gramo/ml)), a partir de una solución stock de 1 mg/ml
(miligramo/mililitro =103 gramo/ml) Debería realizarse una dilución 1/10000 (1/104) es decir
pipetear 0.1 µl stock + 999.9 µl buffer de dilución. Conviene entonces hacer diluciones sucesivas
que, con menor error de pipeteo, permitan alcanzar la concentración buscada. Ej. 4 dilucionesseriadas 1/10 x 1/10 x 1/10 x 1/10 = 1/10000, o 2 diluciones seriadas 1/100 x 1/100
Tener en cuenta: Las soluciones diluidas se expresan a menudo en "mili...", "micro...", "nano...",
"pico...", "fento...". Ej: 10 µM, 1 pg/ml, etc. Recordar:
1 mmol (milimol) = 10-3 moles (aplicable a otras unidades: gramo, etc.)
1 µmol (micromol) = 10-6 moles
1 nmol (nanomol) = 10-9 moles
1 pmol (picomol) =10-12 moles
1 fmol (fentomol) = 10-15 moles
Las unidades más usadas en esta materia son “mili” y “micro”
Concentraciones
La masa de sustancia que corresponde a un mol de moléculas de esa sustancia es lo que
conocemos como masa molar M (se utiliza también el término peso molecular PM) y se expresa
en gramos. Ej: la masa molar del oxígeno O2 es de 32 g/mol y del agua 18 g/mol.

1Introducción a la Biología Celular y Molecular
Pero OJO! no confundir con la masa molecular relativa Mr, que aunque coincide
numericamente con M no lleva unidades de masa, sino que, justamente es relativa y nos dice
cuantas veces más pesada es una molécula de una sustancia respecto de la unidad de masa
atómica (u.m.a.), ó de 1 Dalton (Da), que corresponde al átomo hidrógeno.
Así, la Mr del agua es18 u.m.a. o 18 Da, o bien, 18 veces más pesada que un átomo de
hidrógeno.
Las unidades de concentración que utilizaremos serán:
? % p/p: Porcentaje masa en masa, g de soluto por cada 100 g de solución (SN) (soluto +
solvente).
? % p/v: Porcentaje masa en volumen, g de soluto por cada 100 cm3 o 100 ml de SN.
? % v/v : Porcentaje volumen en volumen, ml de soluto por cada 100 ml de SN.
? M :Molaridad, Nº de moles de soluto por cada 1 litro o 1000 cm3 de SN.
? m: Molalidad, Nº de moles de soluto por cada 1 Kg de solvente.
? N: Normalidad, Nº de equivalentes de un ácido o de una base por cada 1 litro de SN.
Ejemplo: Una solución 2 M de HCl es lo mismo que una solución 2 N, mientras que una
solución 4 M de ácido sulfúrico será lo mismo que una solución 8 N para este ácido....