Enzimas

OBJETIVOS

1. Comprobar la actividad de las enzimas a través de reacciones in vitro
2. Estudiar los efectos de algunas variables en la actividad de las enzimas

MARCO TEORICO
Las enzimas son los llamados catalizadores biológicos, entre los se encuentran las enzimas propiamente dichas (las que son de naturaleza proteínica) y las ribozimas (de naturaleza ARN). Estas son las moléculas queaceleran las velocidades de las reacciones y son de importancia fundamental en los procesos metabólicos (anabólicos y catabólicos).

Las enzimas también participan en la regulación hormonal y del metabolismo, de tal manera que son pieza fundamental para los procesos bioquímicos y fisiológicos. La acción catalítica de una enzima se mide en el incremento de la formación del producto, es decir, quecantidad de sustrato (molécula sobre la cual actúa una enzima) es transformado en producto.

Las enzimas poseen diferentes tipos de actividad, según el tipo de reacción catalizada tendrán una especificidad de acción o según la molécula sobre la cual actúan especificidad de sustrato. El sitio de la enzima por donde se une el sustrato a la enzima se conoce como centro activo y debe poseercomplementariedad molecular con el sustrato, en este centro activo debe ubicarse la coenzima (parte orgánica de las enzimas, generalmente vitaminas) y el cofactor (parte inorgánica de las enzimas, generalmente iones metálicos) si la enzima requiere de ellos, se deben ubicar allí dado que es en este centro activo donde se realiza la catálisis enzimática.

Toda molécula que se denomine catalizador debecumplir con las siguientes características:
• No formar parte del producto
• Aumentar la velocidad de reacción
• Disminuir la energía de activación (Ea)

La energía de activación es la energía necesaria para ir desde los reactantes hasta el estado de transición en una reacción, este último (el estado de transición) es el estadio molecular donde se forman y se rompen los enlaces en una reacción yes el estado de mayor energía en el transcurso de la reacción.

Según la reacción que catalicen las enzimas, pueden clasificarse en 6 clases así:

• Clase 1. Oxidorreductasas. Catalizan reacciones de transferencia de electrones entre agentes reductores y/o transportadores de electrones como el NAD+, FAD+, FMN entre otros. Generalmente estas requieren de coenzimas.
• Clase 2. Transferasas.Catalizan la transferencia de grupos de una molécula a otra, en general requieren de coenzimas.
• Clase 3. Hidrolasas. Transfieren grupos donde el aceptor siempre es la molécula de agua.
• Clase 4. Liasas. Llamadas con frecuencia sintasas, catalizan la ruptura o formación de uniones químicas con la formación o eliminación de enlaces dobles.
• Clase 5. Isomerasas. Desplazan grupos dentro de unamolécula sin cambiar la fórmula general.
• Clase 6. Ligasas. Comúnmente llamadas sintetasas, catalizan reacciones de unión de moléculas dependientes de energía y por eso siempre se asocian a la hidrólisis de nucleótidos fosfatados.

Existen varios factores que afectan las velocidades de reacción, variables como:
• pH
• Temperatura
• Concentración de sustrato
• Concentración de enzima
• Tiempo• Presión

Cuando una o varias de las condiciones necesarias para la actividad de una enzima son cambiadas, la enzima comienza a perder actividad dándose la inhibición parcial o total, es decir, si la enzima pierde parte o toda su capacidad catalítica.

MATERIALES Y REACTIVOS
• Baño de agua A 37 ºC
• Tubos de ensayo (15 por grupo de trabajo) con tapones
• Lugol
• Saliva (amilasa salival -ptialina)
• Gradillas
• NaOH 1N
• HCl 1N
• Agua destilada
• Almidón al 2%
• Goteros
• Pipetas de 1mL y de 5mL
• Propipetaeador
• Marcador para vidrio
• Papel absorvente

PROCEDIMIENTO

RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA DE SALIVA:
Uno de los integrantes del equipo, debe lavar su boca para eliminar cualquier residuo de alimento y enjuagarse con abundante agua. Posteriormente, recolecte...