Espectrofotometría

UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMCIAS Y FARMACIA
ESCUELA DE QUÍMICA BIOLÓGICA
DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA I
DOCUMENTO DE APOYO
PRÁCTICA No. 2
ESPECTROFOTOMETRÍA
La espectrofotometría es uno de los métodos de análisis más usados. Este se
basa en la relación que existe entre la absorción de luz por parte de un compuesto, y su
concentración.Cuando se hace incidir luz monocromática (de una sola longitud de onda)
sobre un medio homogéneo, una parte de la luz incidente es absorbida por el medio y otra
es transmitida. Dependiendo del compuesto y el tipo de absorción a medir, la muestra
puede estar en fase líquida, sólida o gaseosa. En las regiones visibles y ultravioleta del
espectro electromagnético, la muestra es generalmente disueltapara formar una solución.
Cada sustancia tiene su propio espectro de absorción, el cual es una curva que
muestra la cantidad de energía radiante absorbida. A una determinada longitud de onda,
cada sustancia absorbe una cantidad de radiación que es distinta a la que absorbe otro
compuesto.
Figura 1. Espectro de absorción de dos compuestos diferentes

Fuente: (Alomar & Fuchslocher, 1998)

Laespectroscopia UV-Visible estudia el fenómeno de adsorción de la radiación UV
Visible de moléculas orgánicas e inorgánicas. La región visible, a la que es sensible el ojo
humano, se localiza entre los 380 y 780 nm.
Figura 2. Espectro de absorción desde rayos gamma hasta onda corta

Fuente: (Castellano & Longman, 1997)

La absorción de la radiación ultravioleta o visible por moléculas orgánicas einorgánicas, generalmente se produce por la excitación de los electrones de enlace, por lo

tanto, la longitud de onda de los máximos de absorción se puede relacionar con los
enlaces de las especies absorbentes.
Los métodos espectroscópicos se basan en la capacidad de las sustancias de
absorber (o emitir) radiación electromagnética. Éstos se pueden emplear para determinar
la concentración de un reactivo oproducto durante una reacción.
ESPECTROFOTÓMETRO
Es el aparato de medida de la absorción de la radiación electromagnética. Detecta
la cantidad de luz transmitida o absorbida a través de la solución en la celda y la compara
con la que se transmite o absorbe a través de una solución de referencia denominada
“blanco”. La lectura en la escala ya está convertida en absorbancia. La siguiente figuramuestra los componentes básicos de un espectrofotómetro.
Figura 3. Elementos que componen un espectrofotómetro

Fuente: (Chang, 2000)

Todo espectrofotómetro cuenta con los siguientes elementos:


Fuente de luz: un filamento de tungsteno que funciona mediante una fuente de
alimentación estabilizada proporcionando una radiación de intensidad constante el
tiempo suficiente para asegurar una buenareproducibilidad de las lecturas de
absorbancia.



Selector de longitud de onda: se trata de una sencilla red de difracción, que
permite separar la longitud de onda. Tras seleccionar la longitud de onda la
radiación pasa a través de un controlador de luz, que consiste en una abertura en
forma de V que se introduce o saca del haz para controlar la intensidad de luz que
incide en la fotocelda.

Celda: Que contiene a la solución generalmente hecha de un material
transparente que no absorbe la luz. Su longitud y capacidad varía según el equipo
y diseño. Las hay de paredes cilíndricas o planas.



Detector: a éste llega la radiación tras pasar por un filtro y por la muestra. Se trata
de un fototubo de medida. Se basa en el efecto fotoeléctrico de los metales que al
irradiarlos generanelectrones.



Escala de medida: La señal eléctrica del detector una vez amplificada se registra
bien en una escala analógica o en una pantalla digital que proporcionan los
valores de Transmitancia y/o Absorbancia.

TERMINOS IMPORTANTES
TRANSMITANCIA
Es la razón entre la luz monocromática transmitida (P) por una muestra y la
energía o luz incidente (Po) sobre ella. Tanto la energía radiante incidente...