Espectrofotometro infrarrojo

PRACTICA No.1
RUTINAS DE DIAGNOSTICO

OBJETIVO DE LA PRÁCTICA
Conocer las partes principales y el manejo de un Espectrofotómetro UV-Visible y verificar Las condiciones del equipó.

CONSIDERACIONES TEORICA S
La luz visible o UV es absorbida por los electrones de valencia, éstos son promovidos a estados excitados (de energía mayor). Al absorber radiación electromagnética de unafrecuencia correcta, ocurre una transición desde uno de estos orbitales a un orbital vacío. Las diferencias entre energías varían entre los diversos orbitales. Algunos enlaces, como los dobles, provocan coloración en las moléculas ya que absorben energía en el visible así como en el UV, como es el caso del β-caroteno.
Cuando un haz de radiación UV-Vis atraviesa una disolución conteniendo un analitoabsorbente, la intensidad incidente del haz (Io) es atenuada hasta I. Esta fracción de radiación que no ha logrado traspasar la muestra es denominada transmitancia (T) (T = I/Io). Por aspectos prácticos, se utizará la absorbancia (A) en lugar de la transmitancia (A = -logT), por estar relacionada linealmente con la concentración de la especie absorbente según la Ley de Beer-Lambert: A = ε·l·c (ε:coeficiente de absortividad molar, l: camino óptico, c: concentración de la especie absorbente).
El principio de la espectroscopia ultravioleta-visible involucra la absorción de radiación ultravioleta-visible por una molécula, causando la promoción de un electrón de un estado basal a un estado excitado. La longitud de onda comprende entre 160 y 780 nm.
La absorción de radiación UV-visible por unaespecie se da en 2 etapas:
 Excitación electrónica
 Relajación. Puede ser por:
-emisión de calor
-reacción fotoquímica
-emisión de fluorescencia / fosforescencia
Las bandas que aparecen en un espectro UV-visible son anchas, ya que se superponen transiciones vibracionales y electrónicas.
La excitación corresponde a los electrones de enlace, por ello los picos de absorción puedencorrelacionarse con los tipos de enlaces. Por este motivo la espectroscopia UV-visible es válida para identificar grupos funcionales en una molécula.
Efecto del ruido instrumental en los análisis espectrofotométricos:
La exactitud y la precisión de los análisis espectrofotométricos suelen estar limitadas por los ruidos asociados al instrumento.
a) Ruido instrumental como función de latransmitancia:
Una mediada espectrofotométrica lleva consigo tres etapas: un ajuste del 0%, un ajuste del 100% y una medida del porcentaje de T cuando se sitúa la muestra en la trayectoria de la radiación. El ruido asociado a cada una de estas etapas se combina para dar una incertidumbre neta en el valor final de T obtenido.

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

a) EXACTITUD FOTOMETRICA

Empleando laslíneas de emisión de la lámpara de Deuterio:
*Encender la lámpara de UV
*Seleccionar el modo CAL
*Colocar el intervalo de λ entre 660 a 650 nm
*Seleccionar la velocidad de barrido de 15 nm/min
*Colocar las ordenadas límite entre 0 y 100
*Seleccionar en el registrador la velocidad de carta de 60 mm/min
*Oprimir la tecla RUN
*Obtener la línea de emisión de la lámpara de Deuterio*Comparar el valor obtenido con el teórico de 656.1 nm

b) ANCHO DE BANDA ESPECTRAL

Determinar el ancho de banda de la línea de emisión de la lámpara de deuterio a 656.1 nm a la mitad de la altura del pico, convertir las unidades de milímetros o nanómetros.
Repetir el experimento Cambiando parámetros

*Repetir el experimento usando las siguientes condiciones:
-lámpara UV
-modo CAL-intervalo de λ de 490 a 480 nm
-velocidad de barrido 15 nm/ min
-ordenada límite de 0 a 100
- Velocidad de carta 60 mm/min
-comparar el valor obtenido con 486.1 nm

*Repetir el experimento para obtener el espectro completo de la lámpara de deuterio:
-lámpara UV
-modo CAL
-intervalo de λ de 750 a 190 nm
-velocidad de barrido 120 nm/ min
-ordenada límite de 0 a 30
-...