Extraccion der aceites esenciales

Departamento de Ciencias Naturales

IES Alpajés

PRÁCTICA: TÉCNICAS BÁSICAS DE MICROBIOLOGÍA-III ELABORACIÓN DE UN ANTIBIOGRAMA
CIENCIAS NATURALES DE 3º DE E.S.O OBJETIVOS
o o o o o o o Determinar la sensibilidad a diversos antibióticos de un determinado microorganismo Comprender el concepto de antibiótico y su especificidad de acción sobre determinadas bacterias. Conocer el concepto decepa sensible y resistente. Entender el concepto de halo de inhibición. Ser consciente de la importancia de la higiene y el cuidado en la manipulación de materiales biológicos. Comprender la importancia de la eliminación de los residuos orgánicos Conocer el instrumental de laboratorio necesario en microbiología y los procedimientos para su utilización

MATERIALES o Jeringa con suero fisiológicoestéril (solución de ClNa al 0,9%) o Placa “problema” (cultivada en agar-sangre) o Discos de diferentes tipos de antibióticos (4-6 tipos distintos)
o o o

o o o o o o

Tubos de ensayo Placa agar-sangre Regla milimetrada Rotulador de vidrio Cinta adhesiva Pinzas finas Contenedor con lejía Torunda estéril Tablas para determinación de resistencias

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA Antes de empezar o Nose puede tocar nada que vaya a tomar contacto con la muestra biológica con las manos (depresor, asa de siembre, torunda,...) para evitar contaminaciones. o Una vez utilizado este material ha de ser eliminado en un contenedor especial. Estos contenedores serán llevados posteriormente a una planta de tratamiento de residuos biológicos, donde serán incinerados. o Todos los materiales o muestrastomadas deben estar perfectamente identificados: nombre, grupo, fecha e indicativo del tipo de muestra. o Las placas sembradas deben sellarse con cinta adhesiva al finalizar para evitar su contaminación o la nuestra. o Al acabar la práctica, se deben lavar bien las manos.

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Siembra en césped del microorganismo problema o Tomamos conuna jeringa una pequeña cantidad de suero fisiológico estéril (2-5 ml) y lo vertemos en un tubo de ensayo. o A partir de la placa problema, que contiene colonias del microorganismo cuya sensibilidad a los antibióticos queremos determinar, tomamos una muestra SUPERFICIAL de UNA SOLA COLONIA con un asa de siembra. o Introducimos el asa de siembra con la muestra en el tubo y agitamos el asa pararealizar una suspensión de las bacterias en el suero fisiológico. Al acabar echamos al contenedor de residuos el asa de siembra. o Introducimos una torunda estéril en el tubo y se pasa muy suavemente por la superficie de una placa agar-sangre nueva. En esta ocasión realizaremos una siembra en césped, es decir, por toda la superficie de la placa, para conseguir que crezca bacterias de modo masivo (nointeresa aislar bacterias como en la práctica del frotis faríngeo). Es importante que la siembra sea SUPERFICIAL, sin profundizar en el medio de cultivo. o Se tapa la placa y se rotula indicando en el nombre, grupo y fecha y marcando con una A la tapa (antibiograma)
Figura 1

Colocación de los discos de antibiótico Tomamos ahora con las pinzas –NUNCA CON LAS MANOS- un disco de cada uno de losantibióticos que se facilitan (cada disco es un papel de filtro que contiene una suspensión de uno o varios antibióticos a la concentración terapéutica). Se deposita el disco suavemente sobre la placa, sin tocar con la superficie con las pinzas. Es muy importante que el disco contacte con el medio de cultivo en un único sitio. Realizamos la misma operación con los otros cinco antibióticos,colocando los nuevos discos separados de los anteriores, formando un hexágono.
Figura 2 Incubación y observación Se llevan las placas a incubar a 37ºC (temperatura corporal), durante 24 horas. Tras este período se recogen las placas y SIN ABRIR se observa el crecimiento bacteriano.

Medición del halo de inhibición Por la parte trasera de la placa incubada mediremos el diámetro de los halos de...