Fingerprint

TRABAJO PRÁCTICO N°1:
TÉCNICA DNA FINGERPRINT

Introducción

En este laboratorio, desarrollaremos la técnica de biología molecular, DNA fingerprint, las técnicas moleculares se define como las técnicas usadas en el laboratorio para aislar DNA o extraerlo en alta pureza para visualizarlo, analizar mutaciones, amplificarlo, cortarlo, etc. (1). En nuestro caso DNA fingerprint (Huella dactilarde DNA) es un método que consiste en identificar a un individuo específico a nivel genético y molecular (2). Esta técnica fue descubierta en el año 1985 por Alec Jeffreys y el primer caso donde fue utilizada fue medicina forense, la técnica en general, consiste en obtener una muestra de DNA a partir de distintos materiales biológicos, de esta muestra se obtienen fragmentos de DNA cortados porenzimas y siguiendo los pasos de la técnica pueden ser observados por electroforesis en gel. Una de las aplicaciones más frecuentes hoy en día y en la cual nos basaremos hoy, es en investigaciones criminales, ya que al obtener se obtienen muestras de DNA de posibles sospechosos y muestras de DNA encontradas en la escena del crimen, pudiendo determinar qué persona estuvo presente en la escena alcoincidir las muestras encontradas en el lugar físico, con alguno de los sospechosos. Otro campo importante de aplicación es en la determinación de paternidad y mayor aun en el diagnóstico de enfermedades hereditarias al existir mutaciones genéticas demostrándose en la ausencia de alguna de las bandas en los padres del individuo investigado, hoy en día a través de este diagnóstico se puede prevenir eltratamiento de enfermedades como hemofilia, fibrosis quística, enfermedad de Hungtinton entre otras (3). Las técnicas de DNA fingerprint han sido aplicadas también en paleontología, arqueología, en variados campos de la biología y finalmente el diagnóstico médico (4). Además es importante considerar que esta técnica es sencilla si seguimos los pasos y tiempos indicados, sólo debemos tener cuidadoen la manipulación de las muestras para evitar la contaminación de las mismas con alguna otra, como cabellos nuestros o alguna célula epitelial al no utilizar la precaución necesaria, principalmente guantes y cabello tomado.

Objetivos: Nuestro principal es determinar cuál de los cinco sospechosos encontrados, estuvo presente en la escena del crimen. Además otro objetivo importante es aprender aaplicar la técnica de DNA fingerprint. Reconocer los procesos realizados, comprendiendo por qué ocurren las diferentes reacciones y analizar la evolución de las técnicas moleculares comprobando la sencillez de esta técnica para determinar los patrones genéticos presentes en un individuo.

Materiales y Métodos

Para comenzar el trabajo practico, se debió rotular los 7 Microtubos Eppendorf dediferente color, colocándole “S” al sospechoso y el número: sin color ENZ (mezcla de enzimas), verde EC (escena del crimen), azul S1, naranja S2, violeta S3, rojo S4 y amarillo S5. Luego graduamos la Micropipeta a 10 uL y pipeteamos esta cantidad de DNA de cada uno de los sospechosos a su respectivo microtubo, asegurándose que la muestra quedara en el fondo del tubo y cambiamos para usando paracada uno, una punta diferente para evitar la contaminación de las muestras. A cada sospechoso le agregamos 10 uL de ENZ también con diferente punta para cada uno, luego de cerrar herméticamente los tubos, se colocaron en la centrifuga a Spin por 5 segundos y se colocaron los tubos en un soporte flotador para dejarlos en un baño termorregulado durante 45 minutos a 37°C. Durante ese tiempo nuestroscompañeros prepararon el gel de agarosa a 0.8% (0.8g de agarosa por 100ml de TAE) en un matraz de 250ml y masando en balanza analítica con el siguiente cálculo:
Tenemos que: X= 0.8gr * 2ooml ; X= 1,6g
100ml
Llevamos el gel a un microondas a 80°C por un minuto, se fundió y dejamos enfriar.

Para la solución de TAE a partir de 50x se diluye la...