Genetica
Páginas: 7 (1700 palabras)
Publicado: 3 de octubre de 2011
INTRODUCCIÓN
El ADN es una molécula presente en todas las células de los seres vivos y es la encargada de codificar todo lo que nosotros somos, desde el color del pelo hasta las proteínas que tenemos en nuestra sangre. El ADN es una molécula cargada que esta asociada a proteínas y en el caso de los organismos eucariontes está encerrado dentro de un núcleo.
Para analizar el ADN, el primerpaso es la extracción. Existen muchos métodos para la extracción de ADN de acuerdo al tipo celular que lo posea, ya sean plantas, animales o bacterias. Medios mecánicos como el vortex y la centrifugación son indispensables para procesos como precipitación del ADN y lisis celular. Para limpiar la solución resultante se utilizan reactivos detergentes y sufractantes que debido a su conformacióninteraccionan con los componentes membranales y las soluciones, lo que permite al final del protocolo obtener un ADN de calidad para procesos posteriores como la Reacción en Cadena de la Polimerasa, PCR.
FUNDAMENTO
La extracción de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolución y posteriorextracción de la célula. Se empieza por lisar (romper) las células mediante un detergente, vaciándose su contenido molecular en una disolución tampón en la que se disuelve el ADN. En ese momento, el tampón contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, proteínas y otras sustancias en menor proporción. Las proteínas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrán fraccionado encadenas más pequeñas y separado de él por acción del detergente. Sólo queda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla de tampón y detergente, para lo cual se utiliza 1 volumen de isopropanol o 2 a 3 volúmenes de etanol.
OBJETIVO
- Extraer ADN genómico de moscas
MATERIAL
- Solución A
- Solución B
- Isopropanol
- Solución A
- Solución B
- Isopropanol
- Moscas
- Tubo de 1.5ml
- Embolode plástico
- Incubadora
- Hielo
- Centrifugadora
PROCEDIMIENTO (Anexo 1A)
1.- Tomar 5 moscas y colocarlas en un tubo de 1.5 ml el cual contiene 100uL de solución A, en el caso de las moscas macerarlas con un embolo de plástico, para las hojas utilizar homogenizador.
2.- Una vez maceradas añadir 200uL más de solución A y continuar macerando hasta que no haya trozos grandes de tejido.3.- Incubar a 65°C por 30 minutos.
4.- Añadir 800uL de solución B y mezclar por inversión.
5.- Colocar el tubo de hielo por 10 minutos.
6.- Centrifugar a 14 000 rpm por 15 min.
7.- Transferir el sobrenadante a un tubo nuevo y añadir 700uL de isopropanol.
8.- Centrifugar a 14 000 rpm por 15 min.
9.- Remover el sobrenadante a un tubo nuevo y añadir 700uL de isopropanol.
10.- Centrifugar a 14000 rpm por 3 minutos, remover el sobrenadante y volver a centrifugar por unos cuantos segundo (spin), finalmente remover el exceso de etanol con una pipeta y dejar secar la pastilla por 3 minutos.
11.- Resuspender la pastilla de ADN en 20ul de agua ultrapura.
12.- Almacenar a -20°C hasta su utilización.
RESULTADOS
Al final de la práctica observamos la “hebra”
de ADN que se formó en eltubo después de
centrifugar el sobrenadante junto con el isopropanol.
OBSERVACIONES
- Se agregó isopropanol, ya que el tubo es muy pequeño y solo podía caber un volumen en vez de los 2 o 3 volúmenes que se necesitan de etanol.
- Al final de la práctica observamos gránulos de ADN, que después vinieron a formar una hebra.
DISCUSIÓN
La extracción de ADN requiere una serie de etapasbásicas donde en primer lugar tiene que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Los jabones utilizados como lavavajillas emulsionan los lípidos de las membranas celulares y las rompen. En segundo lugar se usa la sal porque evita la unión de las proteínas al ADN. Y...
El ADN es una molécula presente en todas las células de los seres vivos y es la encargada de codificar todo lo que nosotros somos, desde el color del pelo hasta las proteínas que tenemos en nuestra sangre. El ADN es una molécula cargada que esta asociada a proteínas y en el caso de los organismos eucariontes está encerrado dentro de un núcleo.
Para analizar el ADN, el primerpaso es la extracción. Existen muchos métodos para la extracción de ADN de acuerdo al tipo celular que lo posea, ya sean plantas, animales o bacterias. Medios mecánicos como el vortex y la centrifugación son indispensables para procesos como precipitación del ADN y lisis celular. Para limpiar la solución resultante se utilizan reactivos detergentes y sufractantes que debido a su conformacióninteraccionan con los componentes membranales y las soluciones, lo que permite al final del protocolo obtener un ADN de calidad para procesos posteriores como la Reacción en Cadena de la Polimerasa, PCR.
FUNDAMENTO
La extracción de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolución y posteriorextracción de la célula. Se empieza por lisar (romper) las células mediante un detergente, vaciándose su contenido molecular en una disolución tampón en la que se disuelve el ADN. En ese momento, el tampón contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, proteínas y otras sustancias en menor proporción. Las proteínas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrán fraccionado encadenas más pequeñas y separado de él por acción del detergente. Sólo queda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla de tampón y detergente, para lo cual se utiliza 1 volumen de isopropanol o 2 a 3 volúmenes de etanol.
OBJETIVO
- Extraer ADN genómico de moscas
MATERIAL
- Solución A
- Solución B
- Isopropanol
- Solución A
- Solución B
- Isopropanol
- Moscas
- Tubo de 1.5ml
- Embolode plástico
- Incubadora
- Hielo
- Centrifugadora
PROCEDIMIENTO (Anexo 1A)
1.- Tomar 5 moscas y colocarlas en un tubo de 1.5 ml el cual contiene 100uL de solución A, en el caso de las moscas macerarlas con un embolo de plástico, para las hojas utilizar homogenizador.
2.- Una vez maceradas añadir 200uL más de solución A y continuar macerando hasta que no haya trozos grandes de tejido.3.- Incubar a 65°C por 30 minutos.
4.- Añadir 800uL de solución B y mezclar por inversión.
5.- Colocar el tubo de hielo por 10 minutos.
6.- Centrifugar a 14 000 rpm por 15 min.
7.- Transferir el sobrenadante a un tubo nuevo y añadir 700uL de isopropanol.
8.- Centrifugar a 14 000 rpm por 15 min.
9.- Remover el sobrenadante a un tubo nuevo y añadir 700uL de isopropanol.
10.- Centrifugar a 14000 rpm por 3 minutos, remover el sobrenadante y volver a centrifugar por unos cuantos segundo (spin), finalmente remover el exceso de etanol con una pipeta y dejar secar la pastilla por 3 minutos.
11.- Resuspender la pastilla de ADN en 20ul de agua ultrapura.
12.- Almacenar a -20°C hasta su utilización.
RESULTADOS
Al final de la práctica observamos la “hebra”
de ADN que se formó en eltubo después de
centrifugar el sobrenadante junto con el isopropanol.
OBSERVACIONES
- Se agregó isopropanol, ya que el tubo es muy pequeño y solo podía caber un volumen en vez de los 2 o 3 volúmenes que se necesitan de etanol.
- Al final de la práctica observamos gránulos de ADN, que después vinieron a formar una hebra.
DISCUSIÓN
La extracción de ADN requiere una serie de etapasbásicas donde en primer lugar tiene que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Los jabones utilizados como lavavajillas emulsionan los lípidos de las membranas celulares y las rompen. En segundo lugar se usa la sal porque evita la unión de las proteínas al ADN. Y...
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