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BIOLOGÍA 1
Práctica de Laboratorio N°5
Tinción GRAM


Nombres: Alexander Gualli



Introducción

Tinción
Se define a la tinción como el proceso por el cual las moléculas de un determinado colorante se adsorben a una superficie de las muestras a ser analizadas bajo un microscopio. El uso de los colorantes permite cambiar el color de las células de los microorganismos y permite su visualizaciónen el microscopio óptico.
Este proceso es usado principalmente para la visualización de bacterias dado que estas son casi incoloras, no presentan contraste con el medio en el cual se encuentran suspendidas y no pueden observarse claramente sin algún tratamiento previo.
De acuerdo a la reacción que ocurre para que la muestra adsorba el tinte, existen dos diferentes técnicas de tinción:
La tinciónsimple, en la que el colorante utilizado sirve solo para denotar la morfología celular.
La tinción diferencial, en la que el colorante utilizado pone de manifiesto diferencias entre células bacterianas o entre partes de una misma célula. Estas técnicas utilizan más de un colorante o bien ciertos reactivos complementarios para la tinción. una de las técnicas, de este tipo, más conocidas es latinción Gram.
Tinción Gram
Esta tinción es un procedimiento de gran utilidad empleado en los laboratorios donde se manejan pruebas microbiológicas. Es definida como una tinción diferencial, ya que utiliza más de un colorante y clasifica a las bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram
negativas y bacterias Gram positivas.
Fue desarrollada por el científico danés Hans Christian Gram en 1884; hoy endía, sigue siendo una de las tinciones más utilizadas universalmente debido a lo económico, sencillo y eficaz que resulta.
Los principios de la tinción de Gram están basados en las características de la pared celular de las bacterias, la cual le confiere propiedades determinantes a cada microorganismo. La pared celular de las bacterias Gram negativas está constituida por una capa fina depeptidoglicano y una membrana externa, mientras que las bacterias Gram positivas poseen una pared gruesa constituida por peptidoglicano, así pues, la composición química y el contenido de peptidoglicano en la pared celular de las bacterias Gram negativas y Gram positivas explica y determina las características tintoriales.
La tinción de Gram se basa en colocar como colorante primario cristal violeta, elcual tiene afinidad con el peptidoglicano de la pared bacteriana. Posteriormente, se coloca lugol, el cual sirve como mordiente e impide la salida del cristal violeta por la formación de un complejo cristal violeta-yodo que satura los espacios del peptidoglicano de la pared bacteriana. En seguida, se coloca una mezcla de alcohol-acetona, la cual deshidrata la pared bacteriana y cierra los poros dela misma, también destruye la membrana externa de las bacterias Gram negativas debido a que ésta es soluble a la acción de solventes orgánicos, como la mezcla de alcohol-acetona. Las bacterias Gram positivas, al contener una gran cantidad de peptidoglicano, retienen con mayor fuerza este complejo, mientras que las Gram negativas no lo pueden retener por tener menos cantidad de peptidoglicano. Porúltimo, se coloca safranina, la cual funciona como un colorante secundario o de contratinción y sirve para teñir las bacterias que no pudieron retener el complejo cristal violeta-yodo.
Hay bacterias de un mismo género que pueden observarse en la misma muestra como Gram positivas y como Gram negativas, a este evento se le llama tinción Gram variable secundaria a alteración en nutrientes, temperatura,pH o concentración de electrolitos.
No todas las bacterias se pueden teñir por esta técnica ya que carecen de pared celular (micoplasma) o su pared celular tiene una composición química diferente (micobacterias, que cuentan con una gran cantidad de ácidos micólicos).
Las bacterias Gram positivas se observan de color azul oscuro a morado, mientras que las Gram negativas se observan de color...