kiernan entero

5.4. Compuestos fluorescentes
Las características químicas que permiten a un compuesto orgánico la fluorescencia no son tan fáciles de
definir como las que son responsables del color. Con el fin de obtener fluorescencia, una molécula debe contener
un sistema conjugado de dobles enlaces en su esqueleto de hidrocarbonos. Los dobles enlaces pueden incluir
algunos anillos aromáticos, de hecho, lossistemas conjugados cíclicos están asociados a una fluorescencia más
fuerte que los sistemas lineales. Los compuestos fuertemente fluorescentes, que son los únicos de interés en
microscopia, usualmente tienen moléculas coplanares rígidas. Por esto, el fluoreno, cuya planaridad está
estabilizada por un puente de metileno, es más fluorescente que el bi -fenil en el cual los dos radicales fenil sonlibres de rotar sobre el enlace simple que los une:

Los
compuestos con un sistema de anillos coplanares fusionados son más fluorescente s cuando el anillo esta todo
unido de lado a lado que cuando hay un dobles en la estructura. El antraceno, por lo tanto, fluoresce más brillante
que el fenantreno en respuesta al mismo nivel de excitación lumínica. Es decir, el antraceno tiene la mayor eficacia
defluorescencia de los dos compuestos:

La
fluorescencia también se ve afectada por sustituyentes en el esqueleto de hidrocarburos conjugados en la
molécula. Cuando un solo sustituyente está presente, la eficacia de fluorescencia por lo general se incrementa por
-OH, -OCH3, -F, -CN, -NH2, -NHCH3, y -N(CH3) 2 , y reducida por >C=O, -COOH, -Cl, -Br, -NO2 o –SO3H. Las cadenas
laterales del alquilo porlo general no tienen efecto a menos que impidan estéricamente la asunción de una
configuración planar. Las generalidades previamente mencionadas no siempre se aplican cuando hay más de un
sustituyente presente. El ácido salicílico (ácido o-hidroxibenzoico), por ejemplo, es fluorescente a pesar de su grupo
carboxilo. Con componentes heterocíclicos, incluyendo muchos colorantes, la situación es compleja y no es del
todo comprendida. Las propiedades fluorescentes de tales sustancias no pueden ser predichas por una simple
inspección de su fórmula estructural. Juarranz et al. (1986) encontró que la fluorescencia de los colorantes se

correlaciona con el número de enlaces conjugados en la molécula. Es más probable que un colorante sea
fluorescente si su número esta entre el rango de los 28-30.La fluorescencia de los compuestos puede ser influenciada por otras sustancias con las cuales se mesclan y
por el pH de un solvente acuoso o un medio de montaje histológico. Para una explicación más detallada, pero aun
introductoria de la fluorescencia de los compuestos orgánicos, consultar Bridges (1968).
5.5. Combinación del colorante con sustratos
La unión del colorante a los textiles ha sidoestudiado por muchos años (consulte Giles, 1975; Hunger,
2003; Zollinger, 2003). En la coloración de textiles la mayoría de la tintura disuelta se desplaza dentro del material a
teñir. El agotamiento del baño de tintura se logra comúnmente por el calentamiento y la adición de sales
inorgánicas. En contraste, el histólogo usa un exceso de solución de tinción, por lo general a temperatura
ambiente, yla cantidad de tintura tomada por las células manchadas o secciones de tejido so n una proporción
insignificante de la presente en el recipiente. Se dice que la coloración puede ser progresiva cuando la solución de
tinción se deja actuar lentamente hasta alcanzar el efecto deseado. En la coloración regresiva, un objeto es sobre
teñido a propósito, y luego puesto en un líquido (a menudo agua,alcohol, o alcohol acido) que remueve
lentamente el colorante hasta que este deje solamente los componentes en los que se quería ver coloración. Este
proceso de remoción controlada de una tintura es conocido como diferenciación o desteñimiento. El éxito de
ambos métodos, el progresivo y el regresivo, de coloración dependen del hecho de que los colorantes se unen
mejor a algunos componentes celulares...