Oxidacion Lipidica

Métodos para medir el daño oxidativo
RESUMEN
El desbalance en la producción de especies reactivas del oxígeno y la defensa antioxidante provoca un daño oxidativo conocido como estrés oxidativo, que lleva a una variedad de cambios fisiológicos y bioquímicos, los cuales provocan el deterioro y muerte celular. Se puede medir este tipo de daño mediante métodos directos e indirectos. Entre losprimeros tenemos la medición de la concentración de agentes oxidantes, que es muy difícil por su corta vida media y lo costoso que resultan los equipos, lo que hace imprescindible medirlos indirectamente mediante: 1) Determinación de productos terminales de la acción oxidante sobre biomoléculas: los métodos para medir peróxidos lipídicos son el patrón de oro, cuando se trata de probar el papel de losoxidantes en algún tipo de daño celular. 2) Medición de la concentración de antioxidantes. 3) Medición del estado antioxidante total: este método refleja el balance dinámico entre el sistema antioxidante y los prooxidantes. Son incontables los esfuerzos que se realizan en el ámbito mundial para el desarrollo de nuevos y más sencillos métodos.
Cómo medir el daño oxidativo
El daño oxidativo sepuede medir de forma directa o indirecta:
Métodos directos
Medición de la concentración de agentes oxidantes. Durante los últimos años se ha tratado de medir la concentración de agentes oxidantes en el organismo, pero ha resultado difícil en muchos casos, por tener éstos un tiempo de vida media muy corto. El radical hidroxilo tiene una vida de 10-10. La espectrometría de la resonancia de larotación (espín) de electrones es la única técnica analítica que mide directamente las EROs, pero es muy costosa.
Recientemente ha sido desarrollado un equipo fotométrico con reactivos incluidos para determinar los niveles de RLO en sangre (anunciado en Clin Lab International 1998;22(5):12).
La prueba está basada en el hecho de que los metales de transición, una vez liberados de su forma quelante, formaen que generalmente se encuentran en el plasma y dentro de las células, tienen la capacidad de catalizar reacciones del tipo REDOX, cuyos productos son atrapados por derivados fenólicos, que resultan en la formación de una solución coloreada que puede ser medida espectrofotométricamente.
Métodos indirectos
1. Determinación de productos terminales de la acción oxidante. Se han desarrolladométodos para medir algunas de las EROs, pero indirectamente, mediante los productos terminales de su acción oxidante sobre proteínas, ADN y lípidos.
Las EROs inducen en las proteínas la acumulación de grupos carbonilos, que pueden ser evaluados después de la condensación con 2-4 dinitrofenilhidrazina (2,4-DNFH), comúnmente utilizado para evaluar la oxidación de proteínas celulares. Este método esmuy laborioso, largo y utiliza gran cantidad de solventes, por lo que recientemente se ha desarrollado un nuevo método ELISA para medir este compuesto.9-12
Más de 12 metabolitos son producidos durante el ataque radicálico al ADN, pero sólo algunos han podido ser utilizados como marcadores de dicho ataque: thymidine glycol (TG) y 8-OH-2?--deoxiguanosin (OH8dg).13-16
La peroxidación lipídica es unproceso complejo, en el cual los ácidos grasos no saturados en los fosfolípidos de las membranas celulares son atacados por radicales que provocan la abstracción de un hidrógeno, formándose hidroperóxidos que son de difícil medición por degradarse rápidamente. No obstante, la lipoperoxidación constituye el patrón de oro cuando se trata de probar la función de los radicales libres en algún tipo dedaño celular, y existen varias formas de medirla:
* Medición de compuestos que reaccionan con el ácido tiobarbitúrico: se basa en la reacción del tiobarbitúrico con el malondialdehído (MDA), producto este del desdoblamiento de los hidro-peróxidos, formándose así un color susceptible de ser medido directamente. Su análisis es usado por su buena practicabilidad y sencillez, pero le falta...