Quimica

FOTOCOPIADORA DE ADN “PCR” –Reacción en cadena de Polimerasa-
Durante mucho tiempo, los análisis de ADN tenían el problema de requerir una gran cantidad de la muestra que se quería analizar. Los reactivos que se utilizan son costosos y es poco rentable hacer ensayos con muestras pequeñas, con el riesgo de perder la muestra. Por tanto, se dificultaban mucho los análisis de pequeñas cantidades deADN, tales como una gota de sangre en la escena de un crimen. En 1983, el bioquímico estadounidense Kary B. Mullis y su equipo diseñaron una solución muy simple para sobrellevar este problema: una verdadera fotocopiadora de ADN que permitía hacer millones de copias a partir de una sola molécula en sólo unas horas. Este descubrimiento fue llamado PCR (Polymerase Chain Reaction o Reacción en Cadenade la Polimerasa) y, aunque su utilidad no se reconoció inmediatamente, en 1991 ya se había generalizado su uso. En 1993, Mullis recibió el premio Nobel de Química por este trabajo.
Funcionamiento de la PCR
La PCR tiene un funcionamiento muy similar a la replicación del ADN que ocurre antes de la división celular. Requiere de una polimerasa, la enzima que utilizan las células para copiar elADN, abundantes nucleótidos y unas secuencias pequeñas de ADN llamadas cebadores oligonucleotídicos, a partir de los cuales se inicia la copia de la hebra de ADN. La actividad se desarrolla en ciclos de tres fases:
1. Desnaturalización de la cadena molde de ADN: con el fin de separar las dos hebras de la cadena de ADN, es necesario romper los puentes de hidrógeno que las unen. Para ello, se calientala muestra hasta una temperatura de 90 a 95 °C por 30 segundos.
2. Templado y cebado: para que los cebadores puedan unirse a la hebra, es necesario bajar la temperatura a 55 °C por 20 segundos.
3. Polimerización: en esta fase, la polimerasa comienza a añadir nucleótidos a la hebra copia usando como molde la hebra original. Esto se hace al mismo tiempo en ambas cadenas.
Este ciclo dura unos dosminutos y se repite unas 30 veces antes de renovar los cebadores, los nucleótidos y la polimerasa. Dado que en cada ciclo se producen el doble de las cadenas presentes, la cantidad de copias aumenta exponencialmente en cada ciclo y estos 30 ciclos bastan para producir mil millones de copias en menos de tres horas. En las primeras pruebas de la PCR, la polimerasa era desnaturalizada por el calorde La fotocopiadora de ADN la primera fase, por lo que era necesario añadir más durante cada ciclo. Ese problema fue fácilmente resuelto con el uso de una polimerasa extraída de una bacteria termorresistente, Thermus aquaticus, que vive en las fuentes termales del Parque Nacional de Yellowstone, Estados Unidos.
En la actualidad, esta polimerasa termorresistente, llamada Taq, se produce medianteingeniería genética. Hoy en día se comercializan kits portátiles PCR, que pueden ser utilizados fácilmente por investigadores sin mucho conocimiento en genética molecular. Sin embargo, dada la efectividad del método, es muy importante evitar que las muestras se contaminen con ADN foráneo.


















PUNTOS!!!!
FOTOCOPIADORA DE ADN “PCR” –Reacción en cadena de Polimerasa-1. Denise ~
Durante mucho tiempo, los análisis de ADN tenían el problema de requerir una gran cantidad de la muestra que se quería analizar. Los reactivos que se utilizan son costosos y es poco rentable hacer ensayos con muestras pequeñas, con el riesgo de perder la muestra. Por tanto, se dificultaban mucho los análisis de pequeñas cantidades de ADN, tales como una gota de sangre en la escena deun crimen. En 1983, el bioquímico estadounidense Kary B. Mullis y su equipo diseñaron una solución muy simple para sobrellevar este problema: una verdadera fotocopiadora de ADN que permitía hacer millones de copias a partir de una sola molécula en sólo unas horas. Este descubrimiento fue llamado PCR (Polymerase Chain Reaction o Reacción en Cadena de la Polimerasa) y, aunque su utilidad no se...