Reacciones

4. Principio químico de la prueba de biuret
La reacción se caracteriza por una coloración púrpura cuando los iones cúpricos son complejados por los enlacespeptídicos a pH alcalino. El matiz del color depende del tipo de proteína y su intensidad depende del contenido de proteína presente.
OTRAS PRUEBAS PARA IDENTIFICAR PROTEINASMétodo "dye-binding"
Principio químico
Se caracteriza por la formación de un coágulo de proteína, coloreado e insoluble producto de la reacción de la proteína conuna solución coloreada de ácido sulfónico a pH 2. El anión coloreado se une por asociaciones electrostáticas a los sitios básicos de la proteína, por ejemplo a losgrupos M-amino de lisina, guanidina de arginina, imidazol de histidina y aminos terminales. Además se producen atracciones intermoleculares por interacciones hidrofóbicasentre la proteína y la mitad no iónica del anión y entre el anión unido a proteína y la mitad no iónica del anión en solución.
El coágulo se separa por filtración y semide colorimétricamente el exceso de tintura en el sobrenadante. Esta medida se relaciona con el contenido de proteína.
Lectura
A595nm
Consideraciones
El métodoes empírico por lo que se debe buscar la concentración de tintura ideal que sature la proteína y forme el coágulo pero que no pierda sensibilidad.
Ventajas
Util enanálisis de rutina de muestras similares.
Económico y rápido.
Preciso como el método de Kjeldhal.
Usado como método de referencia.
Desventajas
Dificultad enencontrar tinturas puras.
Desuniformidad en la calidad de las tinturas de un lote de fabricación a otro, por lo que se require la calibración del método con cada lote.