Salting Out - P

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Universidad de Oriente. Núcleo Bolívar.
Escuela de Ciencias de la Salud Dr. Francisco Batisttini C
Departamento de Ciencias Fisiológicas.
Asignatura: Bioquímica.











PRÁCTICA Nº 2
SALADO (SALTING OUT) DE PROTEÍNAS, SU APLICACIÓN EN LA SEPARACIÓN Y DETERMINACIÓN DE ALBÚMINA EN SUERO O PLASMA SANGUÍNEO.












Profesor(a):Bachilleres:
Jesús Cedeño.

Grupo jueves A-2



Ciudad Bolívar, Enero de 2009
INTRODUCCIÓN

Los compuestos proteicos, o proteínas están constituidos por los diferentes aminoácidos presentes en el organismo. Si bien las proteínas existen en una gran variedad, no existe un modelo de clasificación aceptado del todo, por lo cualse ha buscado organizarles de acuerdo a su solubilidad, la forma, la estructura tridimensional que presenta y su función en el organismo. Tomando en cuenta la solubilidad de algunas proteínas en soluciones salinas acuosas, en la bioquímica clínica pueden ser clasificadas de manera algo limitada en albúminas, globulinas, histonas entre otras.


“Las sales neutras ejercen efectospronunciados sobre la solubilidad de las proteínas globulares. A baja concentración las sales incrementan la solubilidad de muchas proteínas, fenómeno que recibe el nombre de solubilización por salado, la capacidad de las sales neutras para influir en la solubilidad de las proteínas está en función de su fuerza iónica, constituyen una medida tanto de concentración como del número de las cargas eléctricasexistentes en los cationes y en los aniones aportadas por las sal. El efecto de solubilidad por salado está causado por cambios en la tendencia de ionización, de los grupos R disociables de la proteína” (Lehninger, 1991 2da edición)

El reactivo de Biuret, cuantifica proteínas, se compone de: hidróxido potásico (KOH) y sulfato de cobre (CuSO4). El reactivo de color azul cambia a violetaen presencia de proteínas y vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. El KOH no participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar la reacción. Este reactivo, se utiliza en un método llamado; método colorimétrico de Biuret, que permite determinar la concentración de proteínas de una muestra, mediante espectroscopia ultravioletavisible a una longitud de onda de 540 nm.


En el caso de la práctica se trabajó utilizando los procedimientos anteriores, con las proteínas; albúmina y globulina. Ambas constituyen gran parte del plasma sanguíneo, en mayor cantidad la albúmina. Esta proteína es fundamental en el mantenimiento de la presión oncótica que es necesaria para la distribución de los líquidos corporales en elcompartimiento intravascular y extravascular localizado en los tejidos, así como para el transporte de bilirrubina y ácidos grasos.











REPORTE DE RESULTADOS


Se sometió al estudio por fotocolorimetría, los tubos de ensayo X1, X2, 3, 4, 5, 6 y 7 (Tubo de ensayo blanco o control), siguiendo las pautas presentes en la guía de prácticas de laboratorio de bioquímica, y se obtuvo lossiguientes resultados:


Tabla 1 Valores de absorbancia obtenidos al final de la práctica

|Tubo |Absorbancia |
|X1 |0,325 |
|X2 |0,057 |
|3 |0,049 |
|4 |0,127 |
|5 |0,234|
|6 |0,293 |
|7 |0,000 |

Fuente: Fotocolorímetro Laboratorio de Bioquímica

Tomando en cuenta el estándar de proteínas establecido en la guía práctica
(8 mg/ml), se calculó el valor en miligramos de proteínas contenidas en cada tubo de ensayo utilizando la siguiente fórmula:

8mg de proteínas 1ml...