Técnicas Citoquimicas
Páginas: 7 (1701 palabras)
Publicado: 1 de octubre de 2012
TÉCNICAS CITOQUÍMICAS DE IDENTIFICACIÓN LEUCOCITARIA
La citoquímica estudia la composición química de la célula y permite detectar la localización topográfica de algunos principios inmediatos, enzimas, metales pesados y otras sustancias. Se considera como un nexo de unión entre la morfología y la bioquímica.
Las técnicas citoquímicas son un complemento de las tinciones hematológicas, y pormedio de ellas se localizan enzimas y sustancias inorgánicas., mejorando así la diferenciación celular y en algunos casos también sirven para el diagnóstico de ciertas leucemias.
Los componentes celulares que son posibles revelar con el estudio citoquímico son:
• Enzimas (oxidantes e hidrolíticas)
• Glucógeno
• Lípidos
Entre las enzimas oxidantes se encuentra la peroxidasa leucocitaria.Entre la enzimas hidrolíticas (hidrolasas) se encuentran entre otras las fosfatasas ácidas, fosfatasas alcalinas, esterasas específicas y no específicas.
PROCESOS EN LA TÉCNICA CITOQUÍMICA
Las tinciones citoquímicas se realizan en frotis de médula ósea o sangre periférica.
1. Fijación de la extensión: Evita el deterioro celular al preservar las estructuras y reactividad funcionalcelulares evitando fenómenos nocivos para las mismas e impidiendo también la difusión de componentes bioquímicos entre los diferentes compartimentos celulares así como al medio extracelular.
Se puede realizar con un gran número de sustancias fijadoras como: metanol, etanol, acetona, que actúan coagulando las proteínas celulares así como el formaldehído y glutaraldehído, que actúan formando puentesintra e inter-proteicos, de manera que se altera menos la estructura celular. Es importante eliminar bien todos los restos de fijador para evitar interacciones con el compuesto que se desea analizar.
2. Incubación en el medio de reacción: Al poner en contacto las células con el medio de reacción se liberan unos productos que, bien por sí mismos o bien combinados con otros, dan lugar a unprecipitado apreciable al microscopio óptico. En al caso de identificación de enzimas se debe controlar bien el pH y la temperatura para optimizar la reacción.
3. Tinción de contraste: Se realiza para facilitar la identificación morfológica de la célula en la que ha se ha producido la reacción ya que permite resaltar en lo posible el producto de reacción y permite una óptima visualización delnúcleo y del citoplasma.
Las reacciones deben tener 3 características: sensibilidad, especificidad y reproductibilidad.
En las leucemias agudas la citoquímica se realiza sobre muestras extendidas de médula ósea, pues en ellas existe mayor representación de la población tumoral, pero puede utilizarse la periferia si el recuento de blastos es elevado.
Las tinciones citoquímicas más comunes son:• Tinción de Mieloperoxidasa
• Tinción de Fosfatasa Alcalina Granulocitaria (FAL o FAG)
• Tinción de Fosfatasa Acida (FAC)
• Negro Sudán B (lípidos)
• Esterasas
• Tinción del ácido periódico de Schiff (PAS) (glucógeno)
PAS
La reacción de PAS o del ácido peryódico de Schiff se basa en la rotura de los enlaces -C-C- presentes en los carbohidratos por la acción del ácidoperyódico, potente agente oxidante, liberándose grupos aldehído que al combinarse con el reactivo de Schiff dan un compuesto de color rojo púrpura intenso. Identifica al glucógeno en el citoplasma celular.
La reacción del PAS ha perdido utilidad en el diagnóstico hematológico después de la aparición de mejores marcadores. Sigue teniendo interés en la diferenciación de diferentes tipos de leucemiaslinfoblásticas, en la eritroleucemia y en diversas mielodisplasias.
NEGRO B DE SUDÁN
Es una coloración no enzimática útil en patología mieloide. Tiñe los fosfolípidos y otros lípidos, colorea los gránulos azurófilos y específicos de los granulocitos y tiene la ventaja de que con el tiempo no disminuye la actividad. Los neutrófilos segmentados y sus precursores muestran unos gránulos...
La citoquímica estudia la composición química de la célula y permite detectar la localización topográfica de algunos principios inmediatos, enzimas, metales pesados y otras sustancias. Se considera como un nexo de unión entre la morfología y la bioquímica.
Las técnicas citoquímicas son un complemento de las tinciones hematológicas, y pormedio de ellas se localizan enzimas y sustancias inorgánicas., mejorando así la diferenciación celular y en algunos casos también sirven para el diagnóstico de ciertas leucemias.
Los componentes celulares que son posibles revelar con el estudio citoquímico son:
• Enzimas (oxidantes e hidrolíticas)
• Glucógeno
• Lípidos
Entre las enzimas oxidantes se encuentra la peroxidasa leucocitaria.Entre la enzimas hidrolíticas (hidrolasas) se encuentran entre otras las fosfatasas ácidas, fosfatasas alcalinas, esterasas específicas y no específicas.
PROCESOS EN LA TÉCNICA CITOQUÍMICA
Las tinciones citoquímicas se realizan en frotis de médula ósea o sangre periférica.
1. Fijación de la extensión: Evita el deterioro celular al preservar las estructuras y reactividad funcionalcelulares evitando fenómenos nocivos para las mismas e impidiendo también la difusión de componentes bioquímicos entre los diferentes compartimentos celulares así como al medio extracelular.
Se puede realizar con un gran número de sustancias fijadoras como: metanol, etanol, acetona, que actúan coagulando las proteínas celulares así como el formaldehído y glutaraldehído, que actúan formando puentesintra e inter-proteicos, de manera que se altera menos la estructura celular. Es importante eliminar bien todos los restos de fijador para evitar interacciones con el compuesto que se desea analizar.
2. Incubación en el medio de reacción: Al poner en contacto las células con el medio de reacción se liberan unos productos que, bien por sí mismos o bien combinados con otros, dan lugar a unprecipitado apreciable al microscopio óptico. En al caso de identificación de enzimas se debe controlar bien el pH y la temperatura para optimizar la reacción.
3. Tinción de contraste: Se realiza para facilitar la identificación morfológica de la célula en la que ha se ha producido la reacción ya que permite resaltar en lo posible el producto de reacción y permite una óptima visualización delnúcleo y del citoplasma.
Las reacciones deben tener 3 características: sensibilidad, especificidad y reproductibilidad.
En las leucemias agudas la citoquímica se realiza sobre muestras extendidas de médula ósea, pues en ellas existe mayor representación de la población tumoral, pero puede utilizarse la periferia si el recuento de blastos es elevado.
Las tinciones citoquímicas más comunes son:• Tinción de Mieloperoxidasa
• Tinción de Fosfatasa Alcalina Granulocitaria (FAL o FAG)
• Tinción de Fosfatasa Acida (FAC)
• Negro Sudán B (lípidos)
• Esterasas
• Tinción del ácido periódico de Schiff (PAS) (glucógeno)
PAS
La reacción de PAS o del ácido peryódico de Schiff se basa en la rotura de los enlaces -C-C- presentes en los carbohidratos por la acción del ácidoperyódico, potente agente oxidante, liberándose grupos aldehído que al combinarse con el reactivo de Schiff dan un compuesto de color rojo púrpura intenso. Identifica al glucógeno en el citoplasma celular.
La reacción del PAS ha perdido utilidad en el diagnóstico hematológico después de la aparición de mejores marcadores. Sigue teniendo interés en la diferenciación de diferentes tipos de leucemiaslinfoblásticas, en la eritroleucemia y en diversas mielodisplasias.
NEGRO B DE SUDÁN
Es una coloración no enzimática útil en patología mieloide. Tiñe los fosfolípidos y otros lípidos, colorea los gránulos azurófilos y específicos de los granulocitos y tiene la ventaja de que con el tiempo no disminuye la actividad. Los neutrófilos segmentados y sus precursores muestran unos gránulos...
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