Test De Ames

TRANSFERENCIA DEL MATERIAL GENETICO POR CONJUGACION

1. OBJETIVOS


OBJETIVOS GENERALES

• Determinar la transferencia del material genético entre bacterias por conjugación.


OBJETIVOS ESPECIFICOS

• Adquirir conocimientos teóricos y prácticos de transferencia genética por conjugación

• Llevar a cabo en la practica la conjugación in vitro.

•Efectuar la selección de cepas dadoras y receptoras, mediante medios de cultivo suplementados con antibióticos.

• Establecer la relación entre bacterias transconjugantes y las receptoras totales.
2. MARCO TEORICO:
La conjugación bacteriana es el proceso de transferencia de información genética desde una célula donadora a otra receptora. Este proceso fue descubierto por Joshua Lederberg y EdwardTatum en 1946. Este proceso es promovido por determinados tipos de plásmidos, que portan un conjunto de genes cuyos productos participan en el proceso, y que requiere contactos directos entre ambas células, con intervención de estructuras superficiales especializadas y de funciones específicas (pilus sexuales en los Gram negativos, y contacto íntimo en los Gram positivos).
Algunos de estosplásmidos se comportan como episomas, es decir, que pueden integrarse en el cromosoma; en este caso, si se produce la conjugación, se puede transferir el propio plásmido más un segmento adyacente del cromosoma, que a su vez podrá recombinarse con secuencias homólogas del cromosoma del receptor, dando lugar a un cromosoma híbrido.
La conjugación consiste en la unión de dos bacterias de la misma odiferentes especies para la transferencia del material genético. Las bacterias se unen por medio de un puente citoplasmático por el cual pasa el plásmido F (plásmido de congujación) a la célula receptora. Este proceso sólo se da entre una bacteria que contenga el plásmido (F+) y otra sin el plásmido (F-). El plásmido de conjugación puede intergrarse al cromosoma bacterial, lo que se conoce como Hfr("High Frecuency Recombination"). Sin embargo, cuando el proceso de conjugación se da bajo estas condiciones es bien improbable que haya transferencia del plásmido F. Esto es debido a que cuando está integrado al cromosoma bacterial es muy grande y el puente citoplasmático se rompe antes de que pase completamente por él. Bajo ciertas circunstancias el plásmido F puede contener otros genes diferentes alos de conjugación.


Esquema de la conjugación bacteriana. 1-La célula donante genera un pilus. 2-El pilus se une a la célula receptora y ambas células se aproximan. 3-El plásmido móvil se desarma y una de las cadenas de ADN es transferida a la célula receptora. 4-Ambas células sintetizan la segunda cadena y regeneran un plásmido completo. Además, ambas células generan nuevos pili y sonahora viables como donantes


3. PROCEDIMIENTO
Material y reactivos:
• Guantes
• Micropipetas
• Tips
• Asa de Grigalsky
• mechero
• Agua destilada estéril

• LB liquido
• LB agar
• Cepas dadora
• Cepa receptora
• Tetraciclina
• ciprofloxacino

Precauciones: se utilizo guantes por bioseguridad ya que se trabajo con muestras biológicas patógenas.
Equipos: se utilizo unaestufa, micropipetas de 10 y 100ul
Acción de cada reactivo:
• Agua destilada estéril: solución que se utilizo para realizar las diluciones
• LB agar: permitió el crecimiento de las colonias
• Tetraciclina: Actúa como bacteriostático a las dosis habituales, aunque resultan bactericidas a altas dosis, generalmente tóxicas. Actúan por varios mecanismos como desacoplar la fosforilación oxidativa delas bacterias y provocar una inhibición de la síntesis protéica en el ribosoma de la bacteria
• Cotrimoxazol: tiene acción bactericida mediante un mecanismo sinérgico: El Sulfametoxazol, una sulfonamida, inhibe la síntesis bacteriana del ácido dihidrofólico por competencia con el ácido para-aminobenzoico (PABA) y la Trimetoprima bloquea la producción del ácido tetrahidrofólico desde el ácido...