Ticion De Gram

TINCION DIFERENCIAL DE GRAM
OBJETIVOS:
a. Reconocimiento de bacterias gram positivas y gran negativas mediante la técnica de coloración diferencial.


FUNDAMENTO TEÓRICO:
La tinción de Gram es uno de los métodos de mayor importancia y relevancia que se emplean en el laboratorio de Microbiología. Esta tinción constituye un tipo de tinción diferencial puesto que clasifica las bacterias endos grandes grupos: gran positivas y gran negativas en virtud a la coloración que éstas desarrolle y la coloración dependerá de la diferencia constitutiva en la estructura de la pared celular de las bacterias.
El verdadero valor de la tinción Gram radica en el hecho que se emplea en diversas áreas, para múltiples propósitos y es un procedimiento utilizado por todos los laboratorios.
Lasaplicaciones de la tinción de Gram cubre diversos campos que van desde los aspectos clínicos en los hospitales hasta consideraciones médicos legal para los casos de abuso sexual.
FUNDAMENTOS DE LA TINCIÓN:
Los fundamentos de la técnica se basan en las diferencias entre las paredes
celulares de las bacterias:Gram positivas y Gram negativas
La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de
peptidoglucano, además de dos clases de ácidos teicoicos: Anclado en la cara interna de la pared celular y unido a la membrana plasmática, se encuentra el ácido lipoteicoico, y más en la superficie, el ácido teicoico que está anclado solamente en elpeptidoglucano (también conocido como mureína). Por el contrario, la capa de peptidoglucano de las Gram negativas es delgada, y se encuentra unida a una segunda membrana plasmática exterior (de composición distinta a la interna) por medio de lipoproteínas. Tiene una capa delgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoproteínas. La membrana exterior está hecha de proteína, fosfolípido ylipopolisacárido. Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tiñen diferencialmente debido a estas diferencias constitutivas de su pared. La clave es el peptidoglicano, ya que esel material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana, y las Grampositivas lo poseen en mucha mayor proporción que las Gram negativas.

MATERIALES Y REACTIVOS:
* Cultivos bacterianos, láminas portaobjetos, asade siembra, pinzas para láminas, mechero, alcohol, microscopio,aceite de inmersión.
* Colorantes: la tinción gram se utiliza en estricto orden:
* Cristal violeta
* Lugol
* Alcohol
* Safranina
OBSERVACIÓN:
Durante la experiencia se trabajaron con dos muestras de bacterias, de las cuales sólo conocíamos el nombre de una de ellas que era el Staphylococcus aureus. Al llevar las muestra almicroscopio se pudo observar dos estructuras de diferente color y forma.

En esta primera muestra se observa que se tiñó de un color rojo-rosa y además que estas bacterias tiene forma de bastones, por lo que descartamos que sea el Staphylococcus aureus.
En la segunda muestra se puede observa que se tiñó de color azul-violeta, por la forma de estas bacterias podemos decir que pertenece alStaphylococcus aureus (mas no aun por la coloración).
RESULTADO/DISCUSIÓN:
El lugol entra a las células y forma un complejo insoluble insoluble con el cristal violeta.
Se lleva a cabo después la decoloración, usando una mezcla de alcohol-acetona, sustancias en las que es soluble el complejo I2-cristal violeta. Algunos organismos (grampositivos) no se decoloran, mientras que otros (gramnegativos) lohacen. La diferencia esencial entre esos dos tipos de células está por tanto en su resistencia a la decoloración; esta resistencia se debe al hecho de que en el caso de bacterias gram-negativas, la mezcla de alcohol/acetona es un solvente lipídico y disuelve la membrana exterior de la pared de la célula (y también puede dañar la membrana citoplásmica a la que se une peptidoglicano). La delgada...