Tinción de gramm

UNIVERSIDAD AUTONÓMA DEL ESTADO DE HIDALGO

ÁREA ACADÉMICA DE NUTRICIÓN

Práctica No.3

TINCION DE GRAM

EQUIPO NÚMERO: 4

15 Marzo del 2011

MARCO TEÓRICO

A causa del tamaño imperceptible de las bacterias por la falta de contraste que hay entre estos organismos usualmente transparentes y el medio que les rodea , existe gran dificultad para observarlos con el microscopio óptico, ensu estado natural; esto hizo que se crearan métodos para poder apreciar mejor a los microorganísmos, y poder distinguir muchas caracterìsticas estructurales que no son fàciles de apreciar; siendo la utilización de colorantes el medio más simple de aumentar el contraste.

La tinción de Gram es una técnica de coloración de contraste o diferencial, que se desarrolló en 1844 y se utiliza enmicrobiología para la observación de bacterias, las cuales, con base en la reacción que tengan las paredes de los microorganísmos a los colorantes usados con esta técnica, se les califica en grampositivos y gramnegativos; considerándose bacterias Gram positivas a las bacterias que se aprecian en color violeta y en color rosa bacterias a las Gram negativas, otra ventaja es que se puede efectuar unapercepción primordial a las diferencias entre bacterias, por su morfología (Cocos Bacilos y Espirilos).

Debido a que la tinción bacteriana es un trabajo de rutina, es común que este se realice siguiendo una receta, la cual puede encontrarse en un libro o en alguna página WEB, etc.; sin embargo cuando alguien pregunta que ocurre a nivel celular durante el proceso de tinción, pocas veces queda claroeste suceso sea por que el conocimiento fue borrado por la rutina o por ignorancia; justo se escogió a la tinción de Gram por ser una técnica muy usual para cualquier estudio microbiológico que se desarrolle; siendo entonces el objetivo de este trabajo el que el lector aclare este proceso y pueda en algún momento no solo comprenderlo sobre esta técnica; si no aplicar lo sobre otras técnicas detinción e incluso adquirir o recordar conocimientos sobre características celulares poco apreciadas que sin embargo pueden influir no solo para distinguirlas en el microscopio; si no para considerar estas características para otro tipo de efectos como sería el ataque de virus.3

INTRODUCCIÓN

El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las células bacterianas (tanto Gram. positivascomo Graham negativas).
El lugol está formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio), el cual está presente para solubilizar el yodo. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta.
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Losorganismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram negativos sí lo hacen.
Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Después de la coloración de contraste las células Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen azules.
La safranina puedeo no utilizarse, no es crucial para la técnica. Sirve para hacer una tinción de contraste que pone de manifiesto las bacterias Gram negativas. Al término del protocolo, las Gram positivas se verán azul-violáceas y las Gram negativas, se verán rosas (si no se hizo la tinción de contraste) o rojas (si se usó, por ejemplo, safranina)
Esta importante coloración diferencial fue descubierta por HansChristian Gram en 1884. En este método de tinción, la extensión bacteriana se cubre con solución de uno de los colorantes de violeta de metilo, que se deja actuar durante un lapso determinado. Se escurre luego el exceso de violeta de metilo y se añade luego una solución de yodo, que se deja durante el mismo tiempo que la anterior; después se lava el portaobjetos con alcohol hasta que éste no...