tincion de gram

Universidad Nacional Autónoma de Nicaragua
UNAN – Managua
Instituto Politécnico de la Salud
Dr. Luis Felipe Moncada
I.P.S






Tema:
Tinción de Gram
Docente: Lic. Benjamín
Carrera: Lic. Microbiología
Elaborado por:
Justa Francisca Bermúdez Pérez
Oscarlett Inmaculada Ampié González
Gema de los Ángeles Berrios



Managua, miércoles 15 de mayo2013






Objetivos

Dar a conocer el fundamento de la tinción de Gram.

Explicar el procedimiento técnico de esta tinción.
Conocer el fundamento de los reactivos utilizados en la tinción de Gram.

Dar ejemplos de diferentes bacterias de acuerdo a su estructura y requerimiento de oxígeno.















Introducción
La tinción de Gram es uno de los métodos de tinción más importantesutilizados en el laboratorio bacteriológico para el examen directo de gran variedad de géneros bacterianos. Su utilidad práctica es indiscutible y en el trabajo microscópico rutinario de microbiología la referencias a la morfología celular bacteriana como: coco, bacilos, positivos, negativos, etc. Se basan justamente a la tinción de Gram.
Esta tinción se denomina así en honor al bacteriólogo DanésChristian Gram, quien la desarrollo en 1844. Sobre la base de su reacción a la tinción, clasifico a las bacterias en dos grandes grupos: las Gram positivas, que retienen el colorante primario (cristal violeta) y se observan de un color azul oscuro o púrpura y las Gram negativas, que son decoloradas al perder el colorante primario y subsecuentemente toman el colorante de contraste safranina observándosede color rojo o rosa.
















Tinción de Gram
Fundamento:
Los fundamentos de la técnica se basan en las diferencias entre las paredes celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas. La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglicano, además de dos clases de ácidos teicoicos: Anclado en la cara interna de la pared celular y unido ala membrana plasmática, se encuentra el ácido lipoteicoico, y más en la superficie, el ácido teicoico que está anclado solamente en el peptidoglicano (también conocido como mureína) Por el contrario, la capa de peptidoglicano de las Gram negativas es delgada, y se encuentra unida a una segunda membrana plasmática exterior (de composición distinta a la interna) por medio de lipoproteínas. Tiene unacapa delgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoproteínas. La membrana exterior está hecha de proteína, fosfolípido y Lipopolisacáridos. Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tiñen diferencialmente debido a estas diferencias constitutivas de su pared.
La clave es el peptidoglicano, ya que es el material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana, y las Grampositivas lo poseen en mucha mayor proporción que las Gram negativas. La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloración, se debe a que la membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes orgánicos, como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglicano que posee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que seformó previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdiéndose la coloración azul-violácea. Pero por el contrario, las Gram positivas, al poseer una pared celular más resistente y con mayor proporción de peptidoglicano, no son susceptibles a la acción del solvente orgánico, sino que este actúa deshidratando los poros cerrándolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristalvioleta/yodo, y manteniendo la coloración azul-violácea.








Preparación del frotis
1. Marcar el portaobjeto con el número del paciente.
2. Colocar una gota de solución salina estéril.
3. con un aplicador de madera tomar una colonia del microorganismo en estudio y suspenderlo en la gota de solución salina colocada en la lámina.
*Los frotis delgados son los mejores resultados.
4. Dejar secar la...