tomate
Páginas: 7 (1659 palabras)
Publicado: 2 de junio de 2013
TOMATE
Identificación de Razas y Biovares de Ralstonia solanacearum Aisladas de Plantas de Tomate
La marchitez bacteriana de las solanáceas causada por Ralstonia solanacearum, es una de las enfermedades con daño más devastador en cultivos de importancia como tomate, papa, berenjena, chile y tabaco
La marchitez bacteriana de las solanáceas causada por
Ralstonia solanacearum, estápresente en el mundo en
regiones tropicales, subtropicales y templadas, atacando a
más de 200 especies de plantas.
La bacteria invade a las plantas hospederas a través de la raíz y coloniza los vasos del xilema en el sistema vascular. Las plantas infectadas muestran disminución de crecimiento, amarillamiento, marchitamiento repentino y mueren rápidamente (Sánchez et al., 2008).
Debido a su diversidadgenética, R. solanacearum es una especie heterogénea
La R3Bv2 de R. solanacearum es una bacteria cuarentenada en Norteamérica y la Unión Europea
La R3Bv2 tiene como principales hospederos papa y tomate, aunque también puede afectar a berenjena, plantas de ornato y malezas
La identificación de la especie de R. solanacearum puede lograrse mediante la técnica de reacción en cadena de lapolimerasa (PCR), utilizando un par de oligonucleótidos universales (759 y 760) que amplifica parte del gen IpxC
La PCR para identificar la Raza 3, se basa en amplificar parte de un
profago presente en el genoma de todas las cepas R3Bv2 probadas (pruebas rápidas de identificación; la primera fue la de flujo bacteriano, la cual consistió en cortar un trozo de tallo y sumergirlo en un vaso deprecipitado con agua destilada, después de unos segundos se observó la precipitación del flujo bacteriano en forma de un hilo continuo de color blanco (Denny, 2006); y la segunda técnica consistió en el uso de inmunotiras (Agdia Inc.), específicas para R. solanacearum, como lo recomienda el fabricante
La hidrólisis de almidón y licuefacción de gelatina se realizó de acuerdo a lo propuesto por Hayward(1964). Todas estas pruebas se realizaron por triplicado.
Obtención de ADN. La extracción del ADN se realizó de colonias bacterianas de R. solanacearum o desarrolladas por 24 h a 28 C en medio de cultivo TZC. La o extracción se realizó mediante lisis por calor a 80 C por 5 min.
Prueba de hipersensibilidad en tabaco. Se preparó una suspensión bacteriana con cada una de las cepas aisladas de R.solanacearum obtenidas, la cual se ajustó a una 8 -1 concentración de 1 x 10 UFC mL en agua destilada esterilizada y se infiltró entre las nervaduras en hojas gruesas de tabaco (Nicotiana tabacum cv. 'Burley') con la ayuda de una aguja hipodérmica de acuerdo con la metodología propuesta por Lozano y Sequeira (1970). Como control negativo, se infiltró solamente agua destilada o esterilizada. Lasplantas se mantuvieron a 28 C bajo condiciones de invernadero y se evaluó, tejido muerto, tejido colapsado y amarillamiento después de 24 h de la inoculación.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Identificación mediante pruebas bioquímicas. De las plantas enfermas de tomate, se obtuvieron un total de ocho cepas aisladas en medio de cultivo TZC y SMSA, las que fueron seleccionadas por las pruebas de flujobacteriano e inmunotiras. Todas las cepas produjeron colonias típicas mucoide, superficie brillosa, borde irregular y color blanco con rosa en el centro en el medio TZC. Después de 72 h, todas las cepas presentaron un color café alrededor de las colonias. Sólo la cepa CRs2 mostró una pigmentación menos marcada que el resto de las cepas. Lo anterior sugiere la obtención de colonias virulentas de acuerdocon lo reportado por Kelman (1954) y Champoiseau et al. (2009), que establecen diferencias entre colonias virulentas con las características anteriores y colonias avirulentas; no mucoides, borde circular y de color opaco. Las pruebas bioquímicas mostraron resultados similares para todas las cepas, semejante a lo reportado en estudios de identificación de cepas de R. solanacearum realizados por...
Identificación de Razas y Biovares de Ralstonia solanacearum Aisladas de Plantas de Tomate
La marchitez bacteriana de las solanáceas causada por Ralstonia solanacearum, es una de las enfermedades con daño más devastador en cultivos de importancia como tomate, papa, berenjena, chile y tabaco
La marchitez bacteriana de las solanáceas causada por
Ralstonia solanacearum, estápresente en el mundo en
regiones tropicales, subtropicales y templadas, atacando a
más de 200 especies de plantas.
La bacteria invade a las plantas hospederas a través de la raíz y coloniza los vasos del xilema en el sistema vascular. Las plantas infectadas muestran disminución de crecimiento, amarillamiento, marchitamiento repentino y mueren rápidamente (Sánchez et al., 2008).
Debido a su diversidadgenética, R. solanacearum es una especie heterogénea
La R3Bv2 de R. solanacearum es una bacteria cuarentenada en Norteamérica y la Unión Europea
La R3Bv2 tiene como principales hospederos papa y tomate, aunque también puede afectar a berenjena, plantas de ornato y malezas
La identificación de la especie de R. solanacearum puede lograrse mediante la técnica de reacción en cadena de lapolimerasa (PCR), utilizando un par de oligonucleótidos universales (759 y 760) que amplifica parte del gen IpxC
La PCR para identificar la Raza 3, se basa en amplificar parte de un
profago presente en el genoma de todas las cepas R3Bv2 probadas (pruebas rápidas de identificación; la primera fue la de flujo bacteriano, la cual consistió en cortar un trozo de tallo y sumergirlo en un vaso deprecipitado con agua destilada, después de unos segundos se observó la precipitación del flujo bacteriano en forma de un hilo continuo de color blanco (Denny, 2006); y la segunda técnica consistió en el uso de inmunotiras (Agdia Inc.), específicas para R. solanacearum, como lo recomienda el fabricante
La hidrólisis de almidón y licuefacción de gelatina se realizó de acuerdo a lo propuesto por Hayward(1964). Todas estas pruebas se realizaron por triplicado.
Obtención de ADN. La extracción del ADN se realizó de colonias bacterianas de R. solanacearum o desarrolladas por 24 h a 28 C en medio de cultivo TZC. La o extracción se realizó mediante lisis por calor a 80 C por 5 min.
Prueba de hipersensibilidad en tabaco. Se preparó una suspensión bacteriana con cada una de las cepas aisladas de R.solanacearum obtenidas, la cual se ajustó a una 8 -1 concentración de 1 x 10 UFC mL en agua destilada esterilizada y se infiltró entre las nervaduras en hojas gruesas de tabaco (Nicotiana tabacum cv. 'Burley') con la ayuda de una aguja hipodérmica de acuerdo con la metodología propuesta por Lozano y Sequeira (1970). Como control negativo, se infiltró solamente agua destilada o esterilizada. Lasplantas se mantuvieron a 28 C bajo condiciones de invernadero y se evaluó, tejido muerto, tejido colapsado y amarillamiento después de 24 h de la inoculación.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Identificación mediante pruebas bioquímicas. De las plantas enfermas de tomate, se obtuvieron un total de ocho cepas aisladas en medio de cultivo TZC y SMSA, las que fueron seleccionadas por las pruebas de flujobacteriano e inmunotiras. Todas las cepas produjeron colonias típicas mucoide, superficie brillosa, borde irregular y color blanco con rosa en el centro en el medio TZC. Después de 72 h, todas las cepas presentaron un color café alrededor de las colonias. Sólo la cepa CRs2 mostró una pigmentación menos marcada que el resto de las cepas. Lo anterior sugiere la obtención de colonias virulentas de acuerdocon lo reportado por Kelman (1954) y Champoiseau et al. (2009), que establecen diferencias entre colonias virulentas con las características anteriores y colonias avirulentas; no mucoides, borde circular y de color opaco. Las pruebas bioquímicas mostraron resultados similares para todas las cepas, semejante a lo reportado en estudios de identificación de cepas de R. solanacearum realizados por...
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