1 TP Medios de cultivo 1

TP Nº 1: MEDIOS DE CULTIVO


Los medios de cultivo para células, tejidos u órganos aportan las sustancias esenciales para el crecimiento y controlan, en gran parte el patrón de desenvolvimiento in vitro.
El metabolismo general de la planta que crece en condiciones de in vivo se reproduce en el cultivo in vitro, aunque las condiciones especiales requieren, en muchos casos el suplemento denutrientes, sobre todo como complemento de sustancias biosintetizadas por las células que deben ser adicionadas en forma de compuestos orgánicos para las necesidades metabólicas, energéticas y estructurales inmediatas.
Estos medios están sustentados en el uso de macronutrientes, micronutrientes, suplementos orgánicos (vitaminas, carbohidratos) y reguladores de crecimiento. La elección de las sustancias ylas combinaciones entre ellos fueron probados desde los comienzos del desarrollo de las técnicas de cultivo in vitro, dando como resultado las soluciones de Knop, Gautheret, De Fossard, White, Gamborg (B5) y Murashige & Skoog (MS), entre otras. Las tres últimas son las más utilizadas en la actualidad, aunque pueden modificarse para los casos de materiales que así lo requieran.

Componentes de losMedios Nutritivos:

El estudio de los medios nutritivos se orienta a obtener formulaciones de composición conocida y controlada, de modo de lograr resultados reproducibles en cualquier época y lugar. Para su preparación se usarán drogas libres de impurezas minerales, de calidad analítica (drogas proanálisis).

Agua
Es el componente que se encuentra en mayor cantidad en el medio y es una fuentepotencial de impurezas que puede afectar el crecimiento de los cultivos.
El agua utilizada en la preparación de medios de cultivo debe ser destilada y desionizada, o bidestilada. Esto se logra mediante el uso de destiladores, filtros de carbón activado o acetato de celulosa y columnas de intercambio iónico. Se debe almacenar en envases de material que no aporten impurezas orgánicas o inorgánicas.(vidrio o PVC)

Macronutrientes
Los macronutrientes son elementos esenciales que la planta los requiere en cantidades del orden de gramos/litro (C, H, N, O, S, Mg, Ca, K, P). Son incluidos en los medios de cultivo en forma de sales inorgánicas, pudiendo el nitrógeno y el azufre ser incorporados como suplemento orgánico (P.ej. caseína hidrolizada, urea, aminoácidos).
El comportamiento de loselementos esenciales en el cultivo in vitro difiere en ocasiones, de lo observado in vivo, debido principalmente a las condiciones propias del crecimiento en un ambiente confinado.

Micronutrientes
Los micronutrientes son elementos esenciales que la planta requiere en cantidades del orden de mg/litro (Fe, Mo, Ni, Cu, Zn, Mn, B). Los micronutrientes del medio de Murashige & Skoog incluyen todos aquelloselementos minerales aceptados como esenciales para plantas superiores, con el agregado de Co y I. El agregado de Na+ o Cl- se verifica para algunos medios en particular, como acompañantes de otros iones.

Carbohidratos
Las células, tejidos y plántulas cultivadas in vitro no poseen las condiciones de irradiancia ni la concentración de CO2 adecuada para realizar fotosíntesis que sustente sucrecimiento. Por ello los carbohidratos proporcionan la energía metabólica y los esqueletos carbonados necesarios para la biosíntesis de aminoácidos y proteínas, polisacáridos estructurales como celulosa, etc.
La sacarosa es el carbohidrato más utilizado en la preparación de medios de cultivo. Las concentraciones varían dentro de ciertos rangos de acuerdo al tipo de respuesta esperada, la más utilizadaes de 3% p/v. Otros azúcares como fructuosa, glucosa, celobiosa, maltosa, rafinosa y galactosa son recomendados para algunas especies en particular.

Vitaminas
Las vitaminas, en la mayoría de los casos, cumplen funciones de cofactores de reacciones enzimáticas (tiaminafosfato, piridoxina), en otros se comportan como sustrato de reacciones metabólicas (ácido nicotínico). La combinación de...