1

CAPÍTULO 1.1.2.

PRINCIPIOS DE VALIDACIÓN DE LAS PRUEBAS DE
DIAGNÓSTICO PARA LAS ENFERMEDADES
INFECCIOSAS

RESUMEN
La validación consiste en la evaluación de un proceso para determinar su idoneidad para un uso particular
e incluye la optimización y demostración de las características de realización. Un ensayo validado genera
resultados de una prueba que identifica la presencia de un componente(ej. un anticuerpo) y permite realizar
predicciones acerca del estado de los sujetos analizados. Los ensayos realizados sobre individuos o
poblaciones con diversos fines, tales como ayudar a: documentar la ausencia de la enfermedad en un país o
región, evitar su propagación a través del comercio, erradicar una infección de una región o país, confirmar
el diagnóstico de casos clínicos, estimar laprevalencia de la infección para facilitar el análisis de riesgos,
identificar los animales infectados con el fin de implementar medidas de control y clasificar los animales
según la salud de la manadas o el estado de inmunización después de la vacunación. Es posible validar
una única prueba para uno o varios propósitos mejorando algunas características de su realización en cada
caso (por ejemplo,elevando el nivel de sensibilidad del diagnóstico - hasta el 99,99%- y disminuyendo a la
vez su especificidad para un ensayo general, o inversamente, estableciendo una alta especificidad asociada a
un bajo nivel de sensibilidad en una prueba confirmativa).
Los principios de validación abordados en este capítulo se centrarán principalmente en los métodos para detectar
anticuerpos en sueros. Noobstante, estos mismos principios podrían aplicarse a la validación de pruebas para
otros componentes en sueros o tejidos. En el capítulo 1.1.3, Validación y control de calidad de los
métodos de la reacción en cadena de la polimerasa utilizados para el diagnóstico de las
enfermedades infecciosas, se amplían los principios aquí esbozados al análisis de un método directo de
detección del agenteinfeccioso: ensayo de diagnóstico molecular.
Si consideramos las variables que pueden afectar a la realización de un ensayo, podremos apreciar más
claramente los criterios que deben tenerse en cuenta para su validación. Estas variables pueden agruparse
en tres categorías: (a) la muestra - que refleja las interacciones hospedador/organismo que influye en la
composición y concentración del componente aanalizar en la muestra de suero; (b) el sistema de ensayo que incluye factores físicos, químicos, biológicos y técnicos que afectan a la capacidad de la prueba para
detectar en la muestra un componente específico; y (c) el resultado de la prueba - es decir, la capacidad del
sistema de ensayo para predecir de forma precisa el estado del individuo o de la población en relación con el
componente encuestión.
Los factores que afectan la concentración y la composición de un componente de la muestra de suero son
atribuibles principalmente al hospedador y son o bien inherentes (v.g. edad, sexo, raza, estado nutricional,
preñez, respuesta inmunológica) o adquiridos (v.g. anticuerpo adquirido de forma pasiva, inmunidad activa
propiciada por vacunación o infección). Factores no relacionados con elhospedador, tales como la
contaminación o el deterioro de la muestra, pueden afectar también al componente a analizar en dicha
muestra.
Los factores que interfieren con la precisión analítica del sistema de prueba incluyen: la instrumentación, el
error técnico, la selección y calibración de reactivos (tanto químicos como biológicos), la exactitud y los
límites de aceptación de los controles, losrecipientes de las reacciones, la calidad del agua, el pH y la fuerza
iónica de los tampones y diluyentes, las temperaturas de incubación y su duración y el error introducido por
la detección de componentes estrechamente relacionados del tipo de anticuerpos con reacción cruzada, el
factor reumatoide o el anticuerpo heterófilo.

Manual de pruebas de diagnóstico para los animales acuáticos 2006

11...