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"Quisiera sufrir todas las
humillaciones, todas las
torturas, el ostracismo
absoluto y hasta la muerte,
para impedir la violencia."

DIAGNOSTICO POR ADN

TECNICAS PARA ANALISIS DE ADN
• En el pasado, el diagnóstico de los desordenes
genéticos se basó en el reconocimiento de
productos secundarios o del efecto celular de
un gen mutante.
• Sin embargo, el progreso reciente en la
tecnología y lamayor comprensión de la
estructura y función de los genes humanos
han generado la oportunidad de investigar y
diagnosticar la enfermedad genética del
propio gen anormal.

• Southern blot.
• 1. Método. Esta técnica combina
electroforesis en gel con el uso de sondas
específicas (Figura).
• - Obtención de ADN. Usualmente se obtiene ADN a

partir de linfocitos. Aproximadamente 5-10 ug se
tratan con unaenzima de restricción que hace cortes
secuencia específicos. Los fragmentos de ADN
resultantes se separan por electroforesis en un gel.
• - Desnaturalización del ADN. El ADN se desnaturaliza
para separar las cadenas, que luego se transfieren a
una membrana.

• - Marcación del ADN. Una sonda de ADN o ARN se
radiomarca y se adiciona al ADN que está sobre la
membrana. La sonda reconoce e hibridacon la
secuencia de ADN complementaria, permitiendo
detectar el fragmento especifico de interés.

• 2. Aplicaciones. El Southern blot es una
aproximación muy común para diagnosticar
ADN.

• - Este método aprovecha el hecho de que las
secuencias dentro de una sonda de ADN reconocen
secuencias similares en el ADN digerido (principio de
hibridación molecular).
• - Muchas enfermedades genéticas sediagnostican a
través de esta técnica.

• 3. Limitaciones.
• - Se requieren cantidades significativas de ADN.
• - La técnica demanda bastante trabajo y puede tomar
7-14 días entregar un resultado.
• - Generalmente involucra el uso de material
radiactivo, lo que requiere un entrenamiento especial
y precauciones de seguridad para el personal del
laboratorio.

Reacción en cadena de la polimerasa(PCR). Es
una técnica poderosa para amplificar en forma
selectiva y rápida secuencias blanco de ADN o
ARN.
•1. Método. La técnica se basa en la
amplificación enzimática de un fragmento de
ADN que está flanqueado por dos segmentos de
cebadores (“primers”) de nucleótidos, que
hibridan con cadenas opuestas de la secuencia a
investigar (figura).

El método consiste de los siguientes pasos:

•-Separación por calor de las cadenas e
hibridación de los cebadores. La técnica trabaja
usando calor para separar las dos cadenas de ADN,
lo que permite que los cebadores se unan a sus
secuencias complementarias.
•- Amplificación. El segmento entre los cebadores
se amplifica en presencia de la Taq polimerasa y
desoxinucleótidos.
•- Cambios cíclicos de temperatura. Incremento de
la temperatura detiene lareacción, y vuelve a
comenzar cuando la temperatura se disminuye. La
cantidad de ADN incrementa rápidamente cada vez
que el ciclo ocurre.

• 2. Aplicaciones.
• - Es extremadamente importante debido a su
sensibilidad, especificidad, y velocidad.
• - Ha revolucionado el análisis genético y la detección
de patógenos de enfermedad.
• - Se utiliza para identificar mutaciones específicas
causantes deenfermedad.
• - Para tipificar marcadores de ADN en estudios de
ligamiento
• - Como un test rápido para identificar micobacterias
atípicas.

• 3. Ventajas y limitaciones.
• - Una ventaja es que únicamente se requieren
cantidades pequeñas de ADN (1 ug o menos, o
únicamente una sola célula).
• - Una limitación es que se debe conocer la
información de la secuencia para sintetizar los
cebadoresoligonucleótidos que son esenciales para
la PCR.

• Secuenciación de ADN.
• - La manera más precisa de caracterizar un
segmento de ADN es obtener la secuencia de
ADN exacta y de ésta manera identificar
variantes anormales.
1. Método.
• - Se utilizan dos métodos para determinar la secuencia
de ADN, los cuales se basan en la separación de
fragmentos que varían en longitud por un solo
nucleótido.
• -...