4BM1_EQUIPO4_REPORTE2 3_PRODUCCIÓN SEPARACIÓN Y PURIFICACIÓN DE ENZIMAS

Instituto Politécnico Nacional

Unidad Profesional Interdisciplinaria de Ingeniería Campus Guanajuato




Laboratorio de Bioconversiones


Reporte # 2
“Producción, separación y purificación de amilasa a partir de Saccharomyces cerevisiae”
Reporte # 3
“Separación y purificación de enzimas”


Equipo 4:
Durán Martínez Beatriz Andrea
López Caudillo Daniel Efraín
Pérez Pérez Karina DanielaSaavedra Romero Brian Nathan
Sánchez González Diana Lorena


Grupo 4BM1

Docentes:
Karla Lizbeth Macías
María Isabel García Vieyra
Guadalupe Hortencia Luévano





Semestre Agosto-Diciembre 2014



Silao, Guanajuato. 07 de Septiembre de 2014

INTRODUCCIÓN

Producción de enzimas
Las enzimas son moléculas de naturaleza proteica que se combinan con uno o más compuestos de modo que permitenque las reacciones se lleven a cabo de forma más rápida, ya que reducen su energía de activación. Por tal motivo son muy empleadas en la industria desde hace muchos años utilizando para su producción la fermentación mayoritariamente ya que tiene una serie de ventajas sobre el de extracción de tejidos animales y vegetales entre las que se encuentran una velocidad de síntesis muy alta, conversión delsustrato con rendimiento elevado y que no requiere grandes extensiones de terreno.1

Al momento de la elección de un microorganismo para la producción de enzimas es necesario considerar que el microorganismo no sea patógeno y debe producir grandes cantidades de enzimas y con bajo costo. Para la recuperación de enzimas se llevan a cabo muchas etapas, entre las que se encuentran: la ruptura celular(en el caso de enzimas intracelulares) y la separación de los sólidos (utilizando centrifugación o filtración). Por otro lado en la purificación de las enzimas podemos encontrar procesos como la precipitación por fuerza iónica (salting out), precipitación por solventes orgánicos miscibles, la ultrafiltración y por último la cromatografía por adsorción.1

Separación y concentración de enzimas
Esnecesario separar las proteínas de los demás compuestos para realizar el estudio de éstas. Las proteínas tienen baja solubilidad en soluciones salinas concentradas. La solubilidad de las proteínas se debe a su alta capacidad de formación de puentes de hidrógeno.2 Esta propiedad de las proteínas puede ser usada para serpurificada. El salting out es un fenómeno que ocurre cuando se reduce la solubilidad de las proteínas agregando sales que provocan el aumento de las fuerzas iónicas. La baja solubilidad es provocada debido a la competencia entre los iones salinos y los solutos disueltos, por las moléculas de solvatación. Cuando la proteínapierde su solubilidad precipita, permitiendo su separación del sobrenadante. Un reactivo comúnmente usado para este proceso es el sulfato de amonio, debido a su elevada solubilidad y además permite obtener soluciones de alta fuerza iónica.3

Saccharomyces cerevisiae
El grupo de hongos unicelulares (eucariotas), más comúnmentellamados levaduras, tienen la capacidad de reproducirse de forma asexual por medio de la gemación y fisión transversal o, por lo contrario, se pueden reproducir en forma sexual a través de la formación de esporas.4

La especie de levadura más estudiada es la de Saccharomyces cerevisiae, la cual tiene lacapacidad de crecer tanto en forma aeróbica como anaeróbica y, por otra parte, es capaz de producir diversas enzimas las cuales pueden degradar diversos sustratos, entre los cuales los más importantes son los azúcares.5

Saccharomyces cerevisiae requiere diversos nutrientes para crecer en óptimas condiciones, entre sus requerimientos se encuentran el...