72753254 MANUAL MICROBIOLOGIA 9 16

Practica Nº 9

CULTIVO DE ANAEROBIOS
OBJETIVO:
Preparar las condiciones adecuadas para obtener un cultivo anaerobio.
FUNDAMENTO:
El oxígeno molecular y el dióxido de carbono son los principales gases que afectan al
desarrollo de las bacterias.
GENERALIDADES:
Las bacterias presentan repuestas ante el oxígeno libre clasificándolas en cuatro grupos:
1.- Aerobias: Son aquellas bacterias que sedesarrollan en oxígeno libre.
2.- Anaerobias: Son aquellas que se desarrollan en ausencia de oxígeno libre.
3.- Anaerobias facultativas: Estas bacterias tienen la capacidad de desarrollarse en
presencia o ausencia de oxígeno libre.
4.- Microaerófilas: Son aquellas bacterias que se desarrollan en pequeñas cantidades
de oxígeno libre.
Los anaerobios incluyen todas las morfologías bacterianas. Tienen lacapacidad de
formar esporas y las características morfológicas con la tinción de Gram están
ampliamente clasificadas. Las infecciones anaerobias en humanos y varios animales
pueden afectar cualquier órgano o tejido cuando las condiciones son apropiadas. Los
anaerobios más importantes en infecciones clínicas son: Bacteroides fragilis, algunas
especies de Clostridia y los géneros Peptococos yPeptostreotococos.
Dentro de los anaerobios podemos encontrar una clasificación de acuerdo a la
tolerancia de la bacteria anaerobia con el oxígeno:
a) Anaerobio aerotolerante: Estas bacterias crecen mejor en ausencia de oxígeno que
en su presencia. Son aisladas fácilmente en la mayoría de los laboratorios donde se
utilizan métodos anaeróbicos sencillos. En esta clasificación se encuentra un númerolimitado de bacterias de importancia clínica.
b) Anaerobio obligado: Estas bacterias no se desarrollan cuando son expuestas al
oxígeno molecular. En este grupo se encuentran la mayoría de las bacterias de interés
clínico.
c) Anaerobios estrictos: Estas bacterias son extremadamente sensibles al oxígeno,
requiere atmósferas libres de este y medios de cultivos reducidos químicamente. En
este grupo sonescasas las bacterias de interés clínico.

MÉTODOS PARA PRODUCIR AMBIENTES ANAEROBIOS
Se reconocen básicamente dos formas de producir ambientes anaerobios, en la
primera se utilizan mezclas de gases de hidrógeno, nitrógeno y dióxido de carbono, las
cuales desplazan al oxígeno presente en el área donde se desea tener el ambiente
anaeróbico (cámara anaeróbica con guantes y tubos con medio prereducido).El segundo es por medio de reacciones químicas en donde se producen
atmósferas sin oxígeno como el Sistema Gas-Pak que es el que se utilizará en esta
práctica y que se describirá a continuación.
SISTEMA GAS-PAK
Este sistema es el más utilizado en los laboratorios por su fácil manipulación.
Consiste en un cilindro que puede ser de cristal o de plástico grueso, un sobre generador
de H2 y CO2, uncatalizador de paladio y un indicador de anaerobiosis (azul de metileno).
Ver figura 1.
Al agregar agua a las sustancias
del sobre (borhidrato de sodio,
bicarbonato de sodio y ácido cítrico),
se lleva a cabo una reacción química
que libera H2 y CO2, este reacciona
con el oxígeno presente en la jarra,
que en presencia del catalizador de
paladio produce agua, la atmósfera
alcanzada después que ha sidoconsumido el oxígeno es de 90% H2 y
8 a 10% de CO2 esto se pone de
manifiesto con el vire del indicador de
azul a blanco en un lapso de 2 a 3
horas. No obstante para obtener un
potencial
de
óxido
reducción
adecuado para el desarrollo de
bacterias anaerobias se requiere de
10 a 12 horas, por lo que las jarras
deben abrirse hasta 48 horas.
.
Figura 1. Sistema Gas-Pak para producir ambienteanaerobio

MATERIAL Y EQUIPO:

•
A
sa
bacter
iológic
a

•
•
•
•
•
•
•
•
•

Mechero Bunsen
Cajas Petri con agar sangre de carnero
Tubos de 13x100 con 5 ml de caldo de tioglicolato.
Jarra de anaerobiosis
Sobres generadores
Catalizadores de paladio
Indicadores de azul de metileno
Desinfectante
Clavos o tornillos oxidados

MATERIAL BIOLÓGICO:

•

Cepas: Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli .

TÉCNICA:...