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LA REACCIÓN EN CADENA
DE LA POLIMERASA A DOS DÉCADAS DE SU INVENCIÓN
IRAM PABLO RODRÍGUEZ SÁNCHEZ*, HUGO A. BARRERA SALDAÑA*

ocos descubrimientos del complejo mundo científico actual pueden ser considerados realmente revolucionarios. Sin embargo, cuando ocurren se transforma el modo en que se piensa y trabaja en el laboratorio. Aunque el progreso en las diferentes ramas de la ciencia pareceser lento y su evolución resulta una letanía de «paso a paso», en el caso de la biología molecular ha sucedido lo contrario. Esta disciplina ha sido afortunada con grandes cambios en tiempos relativamente cortos. Una época nutrida de dichos cambios fue la década de 1970, en la que se produjo un gran número de descubrimientos, como el de las enzimas de restricción, la clonación de genes enplásmidos y fagos, y las técnicas de hibridación en filtro para ADN y ARN, conocidas como “Southern” y “Northern blot”, respectivamente; así como las invenciones de las técnicas de secuenciación química y enzimática para el ADN.1 Otro salto tecnológico ocurrió en 1983, cuando Kary Mullis (figura 1) desarrolló una nueva técnica que hizo posible la síntesis de grandes cantidades de un fragmento de ADN sintener que clonarlo: la reacción en cadena de la polimerasa (conocida como PCR por sus siglas en inglés). Esta técnica es considerada la más revolucionaria del último cuarto del siglo XX.2 Con ésta se consigue copiar millones de veces, en un par de horas, una secuencia predeterminada, dentro de una mezcla de ADN tan compleja como el propio genoma humano, donde la secuencia de interés representa tansólo una diezmillonésima parte.3
CIENCIA UANL / VOL. VII, No. 3, JULIO-SEPTIEMBRE 2004

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Pero la PCR no es sólo una técnica exquisitamente específica, sino también muy sensible, pues en principio para practicarla bastaría una sola molécula, por ejemplo, del genoma humano (~6 picogramos), aunque habi- Fig. 1. Kary B. Mullis. Este sintualmente se emplean gular empleado de la compañía CetusCorporation, en cantidades excesivas Emeryville, California, se hizo de éste (en el orden de acreedor del Premio Nobel en hasta microgramos). 1993 por la invención de la Además, por si es- PCR, técnica utilizada para tos atributos fueran multiplicar millonariamente in pocos, la técnica es tan vitro fragmentos específicos de robusta que puede usar cualquier ADN. Fuente: Archivos de la ULIEG. comosubstrato para la reacción al ADN, sin tener que purificarlo de su fuente natural, y es común emplear productos biológicos diversos como tejidos embebidos en parafina, semen recuperado de escenas de violación, lavados bronquiales, exudados de mucosas, raíces de cabellos o cejas, sangre, extendidos citológicos, etc.; muchas veces basta una simple ebullición de la muestra para lisar, liberar y de pasodesnaturalizar el ADN, dejándolo listo para la reacción.

*Unidad de Laboratorios de Ingeniería y Expresión Genéticas, Departamento de Bioquímica, Facultad de Medicina de la Universidad Autónoma de Nuevo León.

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REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA A DOS DÉCADAS DE SU INVENCIÓN

¿Qué es la reacción en cadena de la polimerasa?
La PCR es un método in vitro de síntesis de ADN con elque un segmento particular de éste es específicamente amplificado al ser delimitado por un par de cebadores o iniciadores que lo flanquean. Su copiado se logra en forma exponencial a través de repetidos ciclos de diferentes periodos y temperaturas de incubación en presencia de una enzima ADN polimerasa termoestable. Así se obtienen en cuestión de horas millones de copias de la secuencia deseadadel ADN.3,4 La PCR es una técnica de biología molecular altamente específica, rápida, sensible y versátil para detectar cantidades ínfimas de un cierto ADN específico, posibilitando su fácil identificación y prescindiendo del uso de radioisótopos, indispensables antes de su invención. Al principio, su inventor enfrentó dos problemas fundamentales: uno era que en cada ciclo había que añadir la...