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CASO CLÍNICO PRÁCTICAS LESIÓN PIEL (días 5 y 6):
Paciente de 21 años con lesiones vesiculosas en la cara que han aparecido y desaparecido dos veces en los últimos 6 meses.
Se recoge muestraraspando la lesión con un hisopo y se introduce en un medio de transporte de virus que es transportado inmediatamente al laboratorio.
1. ¿Qué agentes virales podrían causar este cuadro clínico?
Herpessimple tipo 1 , Herpes simple tipo 2, Virus de la varicela.
2. Cómo se podría realizar el diagnóstico:
Diagnóstico rápido: inmunofluorescencia con uso de anticuerpos monoclonales específicos.Cultivo: líneas celulares MRC-5, Vero, Hep-2. Tipos de cultivos: tradicional (efecto citopático) y Shell vial (cultivo con centrifugación e inmunofluorescencia)
3. Práctica: cultivo convencional en Shellvial
Siembra (día 5)
- Descartar sobrenadante (medio de crecimiento) decantando.
- Inocular 200 L (4 gotas) de la muestra en el Shell vial e incubar 1 hora a 37ºC.
- Añadir 1 mL de medio demantenimiento MEM + 2% suero fetal bovino.
- Incubar a 37ºC durante 24h
Procedimiento de revelado (día 6) : tinción de la monocapa y observación de efecto citopático
Descartar sobrenadante delcultivo en un bote con lejía (llevar de la CUN etiquetado).
Fijación: Alcohol-acetona 1 min
Lavado con agua
Tinción con cristal violeta 1 min
Lavado con agua
Dejar secar
Sacar el cubre delvial con aguja y pinzas y pegar en portaobjetos con una gota de DPX
Ver al microscopio con objetivo de 4x ó 10x
Valorar la presencia de efecto citopático entre distintas parejas
Dibujar loobservado en el cuaderno y anotar procedimiento y resultados
4. Otros cuadros clínicos producidos por herpes: Queratitis, encefalitis, enfermedad de transmisión sexual e infección congénita.
Preparación dela práctica:
Material de CUN:
Cultivo positivo de VHS-1: Prepararlo con anterioridad (3-5 días antes) en MRC5.
Hisopos: Preparar la mitad de los (15/30) hisopos impregnándolos el cultivo de...