Aglutinacion

MANEJO, INMUNIZACION Y SANGRADO DE ANIMALES
Los anticuerpos o inmunoglobulinas son un grupo de glicoproteínas heterogéneas presentes en el plasma y en los tejidos que poseen una especificidad de enlace para un antígeno particular. El método usual para producir anticuerpos policlonales experimentalmente consiste en lainoculación de animales con preparaciones purificadas o parcialmentepurificadas de antígeno (inmunógeno). La administración de un inmunógeno in vivo estimula diferentes células del sistema inmune, dando origen a una población mixta de anticuerpos derivados de un número variado de clones de linfocitos B (policlonal). El suero de un animal inmunizado contiene estos anticuerpos y es referido como antisuero policlonal.
Los anticuerpos policlonales son particularmentevaliosos como reactivos biológicos para elestudio de proteínas, células y tejidos cuando se utilizan en técnicas muy diversas, tales como: ELISA, inmunofluorescencia e inmunotransferencia.
Los métodos de inmunización experimental son muy variados y dependen del uso que se le quiera dar al anticuerpo producido. En general, al establecer un protocolo de inmunización experimental se debe tomar enconsideración un conjunto de factores que afectan el tipo y la magnitud de la respuesta humoral del animal inmunizado. Estos factores son los siguientes: la especie del animal utilizado, la constitución genética del animal, el tipo, la dosis y la ruta de administración del inmunógeno, el número de inmunizaciones (refuerzos) y el uso de adyuvantes.
La selección del animal para la producción deanticuerpos policlonales depende de la cantidad de antisuero deseada, la experiencia previa con el inmunógeno y la distancia evolutiva entre la especie de donde se aisló el inmunógeno y la especie del animal inmunizado. En el laboratorio se inmuniza frecuentemente conejos puesto que son fáciles de mantener, responden bien frente a un amplio rango de antígenos y es posible obtener hasta 25 ml de suero decada desangrado sin efectos dañinos para el animal. Sin embargo, la inmunización experimental puede realizarse también en otras especies, tales como: ratones, ratas, cobayos, gallinas, cabras y ovejas. La constitución genética del animal influye sobre el tipo y grado de respuesta inmune del animal inmunizado. Los genes que codifican el complejo mayor de histocompatibilidad (MHC), los receptoresde antígeno de los linfocitos T y B y otros genes involucrados en los mecanismos inmunoregulatorios juegan un papel fundamental en la respuesta inmune. Por tal razón se suele inmunizar de dos a tres conejos y de 4 a 6 ratones con el mismo antígeno.
La producción de anticuerpos policlonales depende en gran medida de la calidad, cantidad y pureza del inmunógeno así como la especificidad ysensibilidad del ensayo donde se desee utilizar el anticuerpo.
Las proteínas son las moléculas más inmunogénicas, mientras que los carbohidratos, los lípidos y ácidos nucleicos son poco inmunogénicos. En general, mientras más purificado y menos heterogéneo sea un antígeno, mayor será la probabilidad de obtener el anticuerpo deseado con alta especificidad. El principal problema con las preparacionesde antígenos heterogéneas es la falta de especificidad deseada en el antisuero resultante, ya que algunas moléculas contaminantes de la preparación son frecuentemente más antigénicas que el inmunógeno de interés y el antisuero resultante podría tener mayor especificidad hacia las moléculas contaminantes que hacia la proteína de interés. 2
La mayoría de los antígenos de interés son las sustanciassolubles, los cuales tienen una inmunogenicidad variable dependiendo del tamaño de la molécula y de la composición química. Las moléculas más inmunogénicas tienen una masa molecular cerca de 100.000 Da mientras que las sustancias con pesos inferiores a 5000 Da son poco inmunogénicas. Estas sustancias de bajo peso pueden hacerse inmunogénicas si se les conjuga químicamente a una proteína...