AISLAMIENTO DE DNA PLASMÍDICO

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PRÁCTICA 13
AISLAMIENTO DE DNA PLASMÍDICO
INTRODUCCIÓN
Desde el descubrimiento del DNA a mediados del siglo 20 hasta nuestros días el avance
en el conocimiento y la manipulación de los genesha aumentado enormemente, de manera que
han surgido nuevas ramas de la biología encargadas de este tipo de estudios, es el caso de la
biología molecular, que involucra el conocimiento y manejo deconceptos y técnicas básicas que
son el principio para la investigación de diferentes procesos celulares a nivel genético, que
determinan la fisiología y bioquímica de las células vivas. Uno de losmétodos más utilizados en
biología molecular es la clonación, que a nivel molecular consiste en la separación de secuencias
de DNA que son insertadas en vectores, generalmente plásmidos, capaces deautorreplicarse al
ser introducidos en una célula bacteriana, y que a través de este fenómeno se pueden generar un
gran número de copias del gen o fragmento de DNA de interés (Darnel, 1995).
Losplásmidos son moléculas de DNA extracromosómico de cadena doble o sencilla,
circulares y con capacidad de autorreplicación, se les encuentra en muchas especies de bacterias
(Lewin, 1994), estos elementoscontienen la información para especificar funciones importantes
para la bacteria, como son la resistencia a antibióticos o la producción de enzimas de restricción.
Una enzima de restricción es unaenzima capaz de romper la cadena de DNA en un sitio bien
definido, a través del reconocimiento de secuencias. En el caso de los plásmidos, la cadena puede
romperse en un sitio donde a través deenzimas llamadas ligasas se pueden integrar las secuencias
de DNA que interese clonar.
Aproximadamente desde 1970 se han construido diferentes plásmidos en laboratorio con
fragmentos de DNAprovenientes de plásmidos presentes en la naturaleza. Los plásmidos
artificiales y sus derivados son los más usados como vectores en trabajos de recombinación de
DNA. Todos los plásmidos usados como...