Aislamiento De Dna

polidesoxiribonucleotidos pueden formar pares de bases. Los polidesoxiribonucleotidos se puede esperar que se comporten de una manera similar. Otra manera de observar el cambio hipercromico es por destrucción de la doble estructura helicoidal a través de la acción hidrolitica de una nucleasa.
Hay además el hipercromismo residual, que esta presente aun en la medida separado por un cadenasencilla de polímeros, el cual solo se hace evidente cuando el polímero es descompuesto en mononucleotidos. Incluso los di y trinucleotidos muestran hipercromismo residual. Esto es presumiblemente debido a una interaccion entre las bases vecinas vinculadas entre si como los oligo o polinucleotidos. La estructura nativa del DNA es estable en un rango de pH de 2.7 a 12 y la molecula se desnaturaliza pordebajo o por encima de estos valores. La configuración del DNA es inestable a temperatura ambiente en una fuerza ionica menor que 10-4 M. Si la densidad óptica se lee a 260 mu en 25 grados centígrados para el DNA T2 (ver curva en la figura 2.13a) se observara que no hay cambio en la absorbencia cuando dicha solución se calienta hasta una temperatura de alrededor de 75 grados centígrados. Si secontinua el calentamiento, la densidad óptica del DNA aumenta por alrededor de 35 porciento durante un intervalo de quizás 4 grados centígrados. Eventualmente los niveles de absorbencia fuera de los valores caracteristicos desnaturalizan la forma del DNA. La desnaturalización del DNA puede ser detectada por examinación en el microscopio electrónico, o por la gran disminución de la viscosidad en lasolución del DNA. Para describir el efecto hipercromico cuantitativamente, podemos definir en términos de una temperatura Tm en la cual el proceso es medio completado. El valor de Tm se caracteriza particularmente por una especie de DNA y es dependiente para una primera aproximación sobre el contenido de G+C en el DNA en un determinado pH y fuerza ionica. De hecho Marmur and doty dedujeron unaecuación empírica.
Tm = 69.3 + 0.41 (G+C)
Donde G+C es el contenido de guanina mas citosina como moles por ciento del contenido total de la base. El cambio en la absorbencia es característicamente y sorprendentemente muy fuerte para el DNA, indicando que el “melting out” de la estructura doble helicoidal del DNA es un fenómeno coperativo. En otras palabrastan pronto como unas pocas pares de bases comienzan a separarse hay una facilidad inmediata correspondiente de la fusión de pares de bases vecinas. También se deduce que la conformación del DNA original debe haber sido bastante perfecta y que la mayor parte, si no todas tienen su pareja complementaria Watson Crick
Si la solución caliente es enfriada rápidamente, se obtiene la curva b (en fig2.13a) del cual en esta se puede ver que la densidad óptica no regresara a su valor original, incluso a 25 grados centígrados. Hay en efecto una disminución en la absorbencia, pero esta es mucho menor que la disminución esperada, si las moléculas de Dna regresaron a su estado original, dando una conformación doble helicoidal muy ordenada. La preparación del DNA el cual fue calentado y enfriadorápidamente, aun están enroscadas de forma aleatoria a 25 grados centígrados, como puede verse mediante un examen en el microscopio electrónico y por la medición de su viscosidad relativa.
Por otro lado, por ejemplo si la solución de DNA calentada es enfriada extremadamente despacio, tomara quizás 3 hrs para que se enfríe de 91 a 48 grados centígrados, la absorbencia del DNA regresara casi a su valororiginal a los 25 grados centígrados; esto es equivalente para decir que la estructura doble helicoidal es en gran parte exacta al aparearse con sus bases si no esta completamente restaurada. Curiosamente, Marmur, Doty y sus colegas han demostrado que, si este calentamiento y enfriamiento lento, este “recocido” proceso se lleva a cabo biológicamente y activa transformando DNA de D. pneumonia,...