Aislamiento de nucleoproteinas y reconocimiento de DNA

AISLAMIENTO DE NUCLEOPROTEINAS DE DNA

PRINCIPIOS GENERALES

¿Por qué pasa?

Se puede aislar el DNA mediante técnicas sencillas que se basan en inducir el rompimiento de las membranas paraliberar los núcleos, posteriormente se añade una solución hipertónica (NaCl) originando así el estallido de las membranas, después mediante centrifugación se separa el DNA del resto de loscomponentes celulares. Al ser precipitadas, las nucleoproteínas se sedimentan en forma de hilos.

PRINCIPIOS

¿Cómo pasa?
Una fuente importante de nucleoproteínas son los tejidos ricos en núcleos(leucocitos, espermatozoides, células hepáticas, etc.).
Las nucleoproteínas de ADN son solubles en agua y soluciones de alta concentración iónica, pero son insolubles en soluciones de baja concentracióniónica (0.05- 0.25 mol/L) esta propiedad es usada en su extracción. Al ser precipitadas, las nucleoproteínas se sedimentan en forma de hilos.


REACCION DE RECONOCIMIENTO DE DNA

PRINCIPIOSGENERALES

¿Por qué pasa?

Cuando se trata el ADN con difenilamina, se forma un compuesto azul, esta reacción la dan en general las 2-desoxipentosas. En solución, la cadena lineal de unadesoxipentosa se convierte a la forma β-hidroxilevulinoaldehido altamente reactiva, que reacciona con difenilamina para dar un complejo azul. En el ADN únicamente reacciona con la desoxirribosa del nucleótidode purina, así que el valor obtenido representa la mitad total de desoxiribosa presente.

PRINCIPIOS
¿Cómo pasa?
Al ser precipitadas, las nucleoproteínas se sedimentan en forma de hilos. Una delas técnicas empleadas para diferenciar nucleoproteínas de DNA de las nucleoproteínas de RNA es la reacción de difenilamina de Dische, esta depende de la formación de color azul al calentar DNA condifenilamina en disolución acida. La presencia de azúcar reducido se detecta más en los nucleótidos de purina que en los de piridina. Para incrementar la sensibilidad de la reacción y reducir la...