aislamiento microbiano

MICROBIOLOGIA

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INTRODUCCION(1)
En la naturaleza, la mayoría de los microorganismos no se
encuentran aislados, sino integrados en poblaciones mixtas.
Para llevar a cabo el estudio de estos microorganismos y de
sus propiedades, es necesario separar unos de otros y
trabajar con especies aisladas, obteniendo cultivos axénicos
o puros.
Un cultivo axénico o puro es aquel que contieneun sólo tipo
de microorganismo y que procede generalmente de una sola
célula; el crecimiento de ésta origina, en medio sólido, una
masa de células fácilmente visible que recibe el nombre de
colonia.

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INTRODUCCION(2)
Para obtener cultivos axénicos o puros a partir de una población
microbiana mixta, se utilizan las denominadas técnicas de aislamiento,
que fuerondesarrolladas durante el siglo XIX.
En un principio, Lister utilizó diluciones seriadas en medio líquido con
esta finalidad, pero la presencia de contaminación, es decir, de
microorganismos no deseados, dificultó el aislamiento.
La escuela de Robert Koch introdujo los medios sólidos,
complementados con agar, y las placas de Petri en Bacteriología,
permitiendo así la separación física de lascolonias sobre la superficie del
medio de cultivo o en el interior del mismo.
El aspecto de las colonias sirve para diferenciar distintas especies
microbianas
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METODOS DE AISLAMIENTO
• Para aislar células individuales, los microorganismos han de
ser diluidos, debido al gran numero en que normalmente están
presentes.
• La dilución se realiza, normalmente, por uno de lossiguientes
sistemas:
 Siembra por estría en placa
 Vertido en placa
 Extensión en placa.

Para que se pueda contar el número de
colonias en la placa debe estar entre 30 y 300.

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A) EXTENSIÓN EN SUPERFICIE CON CAYADO (1)
Depositar sobre la superficie de
una placa con agar nutritivo una
gota ó 0,1 mL de una determinada
dilución del cultivo de
microorganismosproblema y
extenderlo con ayuda del cayado,
previamente esterilizado, en todas
las direcciones hasta que esté
completamente seco. Incubar la
placa, en posición invertida, a la
temperatura deseada (durante 24,
48 ó 72 horas) según el tipo de
microorganismo.

Siembra por extensión en
superficie para recuento

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A) EXTENSIÓN EN SUPERFICIE CON CAYADO (2)
La posicióninvertida evitará que el agua de condensación se deposite
sobre la superficie del medio, dificultando la obtención de colonias aisladas.

Es una técnica usada para el aislamiento de colonias, que permite igualmente
el recuento de bacterias viables en la muestra, si conocemos exactamente el
volumen de muestra sembrado.

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B) ESTRÍA MÚLTIPLE EN SUPERFICIE
Con un asa desiembra, previamente esterilizada, se toma una muestra del cultivo de
microorganismos y se extiende sobre un área pequeña de la superficie de la placa con
agar nutritivo, en forma de estrías muy juntas, pero sin hacer presión para no dañar el
agar.
Se flamea el asa, se enfría y después de rozar la siembra realizada previamente, se
extiende de nuevo por otra zona de la placa haciendo nuevasestrías. Este proceso se
repite sucesivamente, flameando y enfriando el asa al comienzo de las sucesivas
siembras en estría. Se lleva la placa a incubar, a la temperatura adecuada, siempre en
posición invertida.

Mediante esta técnica se obtienen colonias aisladas a partir de una muestra que
contenga un elevado número de bacterias.

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C) DILUCIÓN EN MASA (1)
En una placa dePetri vacía se deposita un pequeño volumen conocido de
muestra y a continuación se añade el medio de cultivo (agar nutritivo)
fundido y atemperado aproximadamente a 45ºC. Se mezclan ambos por
rotación suave de la placa. De esta forma los microorganismos se
distribuirán de forma homogénea en el medio de cultivo, permitiendo el
desarrollo de colonias separadas por todo el agar.
Otra...