Aislamiento y determinación de ácidos nucleicos

Aislamiento y determinación de ácidos nucleicos


Fundamento

Los ácidos nucleicos el DNA y el RNA son los depositarios moleculares de la información genética. La estructura de todas labiomoleculas y de cada uno de los componentes celulares es producto de la información programada en la secuencia de los nucleótidos de los ácidos nucleicos de una célula.
En la secuencia nucleotídica del DNAcélula se encuentran especificadas las secuencias de aminoácidos de todas la proteínas y las secuencias de nucleótidos de todas las moleculas de RNA. Una célula ordinaria tiene muchos miles degenes, de ahí el gran tamaño de las moléculas de DNA. Las funciones conocidas de DNA son el almacenamiento y la transmisión de la información biológica.
Existen distintos tipos de RNA:
RNA ribosómico(rRNA): componentes de los ribosomas complejos que llevan a cabo la síntesis de las proteínas.
RNA mensajero (mRNA): actúan de intermediarios llevando información desde un gen hasta el ribosoma.
RNAde transferencia (tRNA): moléculas adaptadoras que traducen con fidelidad la información contenida a secuencias específicas de aminoácidos.

Para calcular la concentración y la pureza de los ácidosnucleicos se puede utilizar la espectrofotometría, la absorción a 260 nm permite calcular la concentración (1 unidad de absorbancia (UA) corresponde aproximadamente a 50 µg/mL para DNA de cadena dobley 40 µg/mL para DNA de cadena simple). El cociente A260/A280 da una estimación de la pureza de los ácidos nucleicos.
En esta práctica es fundamental el uso del tampon lisis. Este esta compuesto por:Detergente: SDS(desnaturalizante): dodecil sulfato de sodio, detergente aniónico que solubiliza las proteínas de las membranas.
Quelante: acetato, inhibe las DNAsas y las RNAsas
Sales: mantienen ladoble helice del DNA


Resumen de la práctica

Empezamos colocando en un tubo Falcon el trozo de un hígado de ternera de nuestro grupo (de masa=0,26 g), lo desmenuzamos aplastando el hígado...