Amilasas

TRABAJO PRÁCTICO N° 6
ESTUDIO CINETICO DE LA ENZIMA ALFA-AMILASA.
INTRODUCCION.
La cinética enzimática tiene por objeto el estudio de la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas, así como los factores que en ella influyen y los mecanismos por los cuales transcurren.
La velocidad de las reacciones enzimáticas se puede medir:
- por la cantidad de sustrato que desaparece en launidad de tiempo
- por la cantidad de producto que aparece en la unidad de tiempo
En esta práctica de laboratorio se comprobará la influencia de la concentración del sustrato (S) y de la enzima (E) en la cinética del alfa-amilasa en su acción sobre los enlaces alfa 1-4 del almidón. Para ello nos basaremos en la desaparición del almidón en la unidad de tiempo mediante el seguimiento de la reacciónde color que produce el mismo, así como sus productos de hidrólisis con el Iodo en disolución de Ioduro de potasio (Reactivo de Lugol).
Dado que el almidón está integrado por dos fracciones, la amilosa y la amilopectina, debe tenerse en cuenta las reacciones que ambas producen (así como sus respectivos productos de hidrólisis) con el reactivo de Lugol:
AMILOSA AMILOPECTINA + Amilasa-------------- AMILODEXTRINAS
+IODO = resultado Color azul violeta

MALTOSA + GLUCOSA -----------------------+IODO No dan coloración

Basándonos en las reacciones anteriores podemos estudiar el efecto que provocan en la cinética enzimática la variación de los factores que en ella influyen: c(S), c(E), pH y T, fundamentalmente. En Esta práctica no estudiaremosel efecto del pH y la temperatura.
La influencia de la c(E) podremos estudiarla midiendo la velocidad de la reacción de la forma ya descrita pero utilizando diferentes c(E), manteniendo constante los demás factores. De forma similar se procede con el estudio de la influencia de la c(S).
FORMULE LA PREGUNTA DE INVESTIGACIÓN: -------
FORMULE UNA HIPÓTESIS: ------
FORMULE UN APREDICCIÓN:---------

IDENTIFIQUE VARIABLE INDEPENDIENTE:----
INDENTIFIQUE VARIABLE DEPENDIENTE:-----
IDENTIFIQUE VARIABLES DE CONTROL:…….
Debido a que utilizaremos amilasa comercial extraída de hongos Aspergillus sp debe considerar que la temperatura óptima en este caso es de 50° y su pH óptimo es 7. ¿Cuál es la temperatura y pH óptimos de la alfa amilasa salival (ptialina)?
Responda las siguientespreguntas (si es necesario consulte y busque en la bibliografía):
1. ¿Cuáles son las características estructurales del almidón?
2. ¿Qué tipo de enzima es la alfa-Amilasa salival?
3. ¿Cuáles son los productos que origina la acción de este enzima sobre el almidón?
4. ¿Cuál es el efecto del co-factor ClNa?
5. ¿Qué función cumple el ácido clorhídrico en este experimento?
6. Explique cómo influyen enla velocidad de las reacciones enzimáticas una variación en la concentración del enzima presente, en la concentración del sustrato, el pH y la temperatura.
MATERIALES
• Solución del enzima amilasa al 1% M/V + ClNa % M/V
• Disolución de almidón al 0,25 %.
• Lugol
• Tubos de ensayo.
• placa de porcelana,
• vasos de precipitado,
• baño de agua termostatado a 50° C,
• cronómetro,
•Mechero
• Gradilla
• Termómetro
• PIPETAS
• Gotero de HCl puro (ácido clorhídrico)


EXPERIMENTO 1:
ESTUDIO DE LA INFLUENCIA de la CONCENTRACIÓN DE LA ENZIMA
PROCEDIMIENTO:
1. Tome 4 tubos de ensayo y añada a cada uno 2 ml de disolución de almidón al 0,25 %.
2. Agregue en cada tubo 3 ml de agua
3. Añada a cada tubo 1; 2; 3 y 4 ml de disolución del enzima respectivamente, Añadaprimero el agua y luego la disolución del enzima, pues de lo contrario la reacción comenzará a verificarse y usted no tendrá en cuenta el tiempo transcurrido. Inmediatamente después de adicionar la solución del enzima en cada tubo ponga en marcha el cronómetro y comience a medir el tiempo del experimento.
4. En cada intervalo de 5 minuto ensaye en la placa de cerámica la reacción de la solución...