AMORTIGUADORES

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES
LABORATORIO BIOQUÍMICA
Alumno: _______________________________________ Código: _________________
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PRACTICA 1: EXTRACCION DE ADN Y VISUALIZACIÓN DEL ADN

OBJETIVOS:
1. Realizar la extracción de ADN a partir de células humanas de la mucosa bucal
2. Analizar la importancia de la extracciónde ADN en la investigación en salud humana.
3. Analizar el efecto de los diferentes compuestos empleados en la técnica sobre la
estructura y propiedades de los ácidos nucleicos.
4. Determinar la utilidad de la técnica de electroforesis en la observación y separación de la
molécula de ADN.
5. Analizar la utilidad de la tinción de ADN en su observación.

1. FUNDAMENTO TEORICO
Los ácidosnucleicos tienen como principales funciones la transmisión y expresión de la
información genética. A través de estas funciones determinan no solo la estructura sino que
también regulan todos los procesos fisiológicos y metabólicos de los seres vivos. Existen dos
tipos de ácidos nucleicos, denominados ácido desoxirribonucleico (ADN) y ácido ribonucleico
(ARN), estos compuestos son polímeros denucleótidos, los cuales a su vez se conforman de
tres moléculas diferentes (azúcar pentosa, base nitrogenada y fosfato).
En las células eucarióticas el ADN se encuentra en el núcleo asociado a proteínas
denominadas histonas formando la cromatina. También aparece en organelas como
mitocondrias y cloroplastos. (figura 1). En procariotes (Ej: bacterias) el ADN se localiza en el
citoplasma y nopresenta una membrana de protección.

Figura No 1. Niveles de organización del ADN en células eucariotas. Tomado de La química del
genoma en Locos por la biología. Julio 20, 2011. Disponible en la web:
http://locosporlabiologia.wordpress.com/2011/07/20/la-quimica-del-genoma/
El ARN es un tipo de ácido nucleíco de menor tamaño que el ADN. Existen varios tipos de ARN:
mensajero (ARNm), ribosomal(ARNr) y de transferencia (ARNt) con diferentes funciones, todas
asociadas con la expresión de la información contenida en el ADN. El ARN es sintetizado en el
núcleo en el proceso de transcripción y ejerce sus funciones en el citoplasma.
El estudio de la estructura y propiedades de los ácidos nucleicos ha permitido la comprensión
de procesos asociados a mecanismos de enfermedades genéticas einfecciosas, respuesta
inmune, desarrollo de células cancerosas y resistencia a antibióticos, los cuales han sido
empleados en una serie de campos de la salud. El análisis de la secuencia de los ácidos
nucleicos así como el desarrollo tecnológico de sus procesos, han sido la base para el diseño
de vacunas, producción de fármacos, mejoramiento de la calidad nutricional de especies
vegetales yanimales, resistencia vegetal a plagas, control de enfermedades parasitarias,
terapia y regulación génica.
Los ácidos nucleicos pueden ser aislados mediante la ruptura de la membrana celular y la
nuclear, dejándolos libres en el lisado celular, para su posterior limpieza y precipitación. Esto se
consigue mediante choque osmótico (ej; NaCl 3M), homogenización mecánica, digestión
enzimática (ej;proteinasa K) o tratamiento con detergentes (ej; SDS) o ácidos (ej; HCl).
Después de centrifugar para descartar las células intactas, organelas y restos de membranas, el
sobrenadante que contiene los ácidos nucleicos solubles, es tratado con agentes como fenol,
mezclas de cloroformo-alcohol isoamílico o una solución concentrada de sales (ej: cloruro de
sodio 5M) que permiten separar lasproteínas al desnaturalizarlas. El ADN que era soluble en la
fase acuosa se precipita después de la centrifugación. La preparación de ADN puede ser de
mayor concentración y pureza al adicionar etanol frío. Después de ser secado y disuelto en un
buffer apropiado, el ADN puede ser visualizado mediante su separación en un gel de agarosa y
tinción con el colorante Bromuro de etídio. Bajo luz...