Análisis De Las Regiones 16S Del Adn Mitocondrial Y 18S Del Adn Nuclear De Saccharomyces Cerevisiae

Análisis Molecular de las Regiones 16S del ADN mitocondrial y
18S del ADN nuclear de Saccharomyces cerevisiae

Sebastián Escobar1, Natalia Galvis1, Daniela Vallejo1, Giovanni Torres1
1Estudiantes de Biología, Universidad de Caldas

Resumen
Se procedió a realizar la extracción de ADN de la levadura de gemación Saccharomyces cerevisiae mediante el método del fenol-cloroformo-alcoholisoamílico. La muestra obtenida de ADN se cuantificó usando análisis espectrofotométrico con nanoview espectrofotometer, y posteriormente se visualizó usando geles de poliacrilamida y de agarosa. Tanto la cuantificación mediante espectrofotometría como la visualización por migración en geles indicaron la presencia de un ADN ultrapuro y ultraconcentrado. A partir de estas muestras se diseño laamplificación PCR de 2 regiones, una del ADN mitocondrial (gen 16S ARNr) y otra para el ADN nuclear (gen 18S ARNr), y los resultados se visualizaron en geles de poliacrilamida. A los amplicones obtenidos se les ejecutaron la prueba PCR-RFLP usando la enzima de restricción Hae III, y los resultados se compararon con los productos de la restricción de los mismos genes en Melopsittacus undulatus restringido conHae III, y en Homo sapiens y Bothriechis schlegelii, restringidos con Rsa I. No pudo aceptarse o descartarse la utilidad de estas enzimas para la determinación de polimorfismos de secuencia en ninguno de los dos genes, pero los RAPDs detectaron polimorfismos de tamaño para el gen 18S y un 16S no polimórfico por tamaño.



Introducción

Los ribosomas son el lugar donde se sintetizan lasproteínas tanto en células procariotas como en eucariotas. Se caracterizan como partículas subcelulares y se designan de acuerdo con su coeficiente de sedimentación, expresado en unidades Svedberg (S): 70S para los ribosomas procariotas y 80S para los ribosomas eucariotas. Tanto los ribosomas eucariotas como los procariotas se forman por dos subunidades distintas, compuestas de proteínas y ARNribosómicos. (Cooper y Hausman, 2009). La estructura general de los ribosomas en procariotas y eucariotas es similar, aunque difiere en algunos detalles. La subunidad pequeña del ribosoma de los procariotas (subunidad 30S) está formada por un ARNr 16S y 21 proteínas diferentes, mientras que la subunidad grande (50S) está compuesta por ARNr 23S y 5S y 34 proteínas. Las subunidades de los ribosomaseucariotas son de mayor tamaño y contienen más proteínas que sus análogos procariotas. Las subunidad pequeña (40S) del ribosoma eucariota está compuesta por ARNr 18S y unas 30 proteínas; la subunidad grande (60S) contiene ARNr 28S, 5.8S y 5S además de 45 proteínas (Cooper y Hausman, 2009).

Los análisis de las secuencias de ADN genómico que traducen para las diferentes subunidades ribosomales (ADNr)han sido ampliamente usados para la identificación de microorganismos, principalmente patógenos (Chakravorty et al., 2007 y Tselika, Konstantinidis y Sinetos, 2008) y para el desarrollo de teorías filogenéticas (Aleshin y Petrov, 1999 y Kurtzman y Robnett, 2003). Ambos usos de los genes del ARNr son posibles gracias a la conformación de las diferentes subunidades. Estas están organizadas engrupos filogenéticamente muy estables, los cuales son fundamentales para el funcionamiento normal del ribosoma. Estas regiones están separadas por regiones variables, cuya función hipotética sería la de mantener las zonas conservadas a una distancia y un ángulo determinado entre ellas en la estructura secundaria la cadena de ARNr, lo cual hace que las subunidades formen una especie de órganoestructural del ribosoma (Aleshin y Petrov, 1999).

En el presente trabajo, centraremos nuestra discusión sobre dos de las subunidades del ARNr: la subunidad 16S y la subunidad 18S, ya que estas fueron el objetivo de nuestras amplificaciones PCR.

 Subunidad 16S

La subunidad 16S del ARNr convencionalmente es objeto de estudio en organismos procariotas (Chakravorty et al., 2007). ¿Por qué...