análisis

Materiales y métodos.

-Materiales.
PEG 4000 al 30% p/p en agua destilada pH 7
MgSO4 x 7H20 al 30% p/p en agua destilada pH 7
Tampón fosfato de sodio 200 mM pH 7
Soluciones de BSA en tampónfosfato de sodio en las siguientes concentraciones:
A: 100 mg/ml
B: 60 mg/ml
C: 20 mg/ml
D: 10 mg/ml
E: 1 mg/ml
F: 0.3 mg/ml
Azul de bromofenol.

7 tubos de ensayo, 14 cubetas,micropipeta, vórtex y espectrofotómetro.

Para la actividad eran necesarias 7 soluciones, las cuales fueron preparadas según se describe en la tabla a continuación.

Tubo
Solución BSA [ml]
TampónNa-fosfato [ml]
Azul de bromofenol [µl]
PEG 4000 [ml]
MgSO4 x 7H20 [ml]
1
0,3A
0
25
1,5
1,5
2
0,3B
0
25
1,5
1,5
3
0,3C
0
25
1,5
1,5
4
0,3D
0
25
1,5
1,5
5
0,3E
0
25
1,51,5
6
0,3F
0
25
1,5
1,5
7
0
0,3
25
1,5
1,5
Tabla 1: Soluciones para la formación de dos fases acuosas.

Metodología.
Para la realización del experimento se procedió según se describe acontinuación: se marcaron los 7 tubos de ensayo, con el fin de reconocerlos y luego se les agregó 25 µl del colorante azul de bromofenol. Se les agregó las soluciones de BSA o de tampón, segúncorresponda, y se agitaron en el vórtex. Luego, se les agregó PEG 4000 y sulfato de magnesio según lo requerido. Se agitaron nuevamente, y se esperó la formación de 2 fases.

Una vez que las dos fases sediferenciaban claramente, se tomó 0.5 ml de la fase inferior y 0.1 ml de la fase superior en cada tubo. Cada muestra fue depositada en una cubeta plástica y se completó 1 ml con tampón fosfato. Seles midió la absorbancia a 590 nm en un espectrofotómetro.

Se debe tener en cuenta que, dado que los volúmenes extraídos de muestra para la fase superior e inferior son distintos, se debenmultiplicar por un coeficiente de dilución para así considerar la absorbancia total de 1 ml de solución para cada fase. Para la fase superior, dado que el volumen extraído es de 0.1, su factor de dilución...