Antibioticos

agar.
Objetivo.
-.Determinar la sensibilidad bacteriana a distintos antibióticos utilizando una metodología sencilla y asequible a cualquier laboratorio de Microbiología.
Material
- Cepas bacterinas: Staphylococcus aureus o Escherichia coli
- Caldo de tripticasa soja (TSB) o infusión cerebro corazón (BHI)
- Placas de agar de Mueller-Hinton (M-H)
- Discos comerciales de antibióticos
-Hisopos estériles
- Pinzas de laboratorio
- Estufa de incubación a 37ºC
- Regla o calibrador
Fundamento.
El antibiograma por el método de difusión en agar es una prueba en la que se enfrenta la bacteria inoculada sobre la superficie de un medio de agar a una solución antibiótica absorbida en discos de papel de filtro o en pastillas. Este método fue estandarizado y los halos de inhibiciónobtenidos, correlacionados con la cMI por Bauer y cols.,en 1966. Este estudio dio lugar al método de Kirby-Bauer, que es el recomendado por la Food and Drug Administration (FDA) y el National Committee for Clininical Laboratory Standards (NCCLC), aunque con ligeras modificaciones. Varios factores afectan el halo de inhibición: la carga de antibiótico en los discos, la difusión del antibiótico en el mediode cultivo, el tamaño del inóculo bacteriano, la composición y grosor del medio de cultivo , la velocidad del crecimiento bacteriano y el tiempo de incubación.
El medio de cultivo más frecuentemente empleado es el de Mueller-Hinton, que permite el crecimiento de casi todas las bacterias. Este medio puede ser suplementado con un 5% de sangre desfibrinada de caballo, oveja u otro animal, cuando labacteria lo requiera para su desarrollo. El pH del medio debe estar entre 7.2 y 7.4, y el grosor entre 4 y 6 mm. Los discos de antibióticos son adquiridos comercialmente, aunque también pueden ser preparados. Deben contener la cantidad establecida de antibiótico y ser conservados a 4ºC protegidos de la humedad.
El inóculo bacteriano debe tener una turbidez similar al 0,5 de la escala deMcFarland, aproximadamente 108 UFC/mL, y se prepara en solución salina estéril o caldo de cultivo. La inoculación se puede efectuar con hisopo de algodón estéril.
Las placas se deben incubar a 35-37ºC en atmósfera aerobia. Se debe evitar en lo posible la incubación en presencia de CO2, ya que modifica el pH del medio y esto puede afectar la actividad de algunos antibióticos.
La lectura se debe realizarentre 18 y 24 horas. Este método es adecuado únicamente para bacterias patógenas de crecimiento rápido. Una incubación más prolongada puede dar lugar a interpretaciones erróneas del halo de inhibición.
Cuando se agrega un antibiótico a un cultivo bacteriano en crecimiento exponencial, se observan tres tipos diferentes de efectos:
(a) BACTERIOSTÁTICO: en este caso se observa inhibición en laproliferación, pero sin que ocurra muerte celular. Los agentes bacteriostáticos frecuentemente son inhibidores de la síntesis proteica y actúan uniéndose a los ribosomas. Sin embargo, este enlace no es muy estrecho y cuando disminuye la concentración del antibiótico, éste se libera de los ribosomas y se presenta nuevamente la proliferación. Ejemplo: Cloramfenicol, Eritromicina, Tetraciclina.
(b)BACTERICIDA: evitan la proliferación e inducen a la muerte, pero no tiene lugar la lisis o ruptura celular; éstos generalmente se unen muy íntimamente con sus blancos celulares y no pueden eliminarse por dilución. Ejemplo: Estreptomicina, Neomicina (por fuerte unión al ribosoma), Actinomicina, Mitomicina (por unión al DNA).
(c) BACTERIOLÍTICO: inducen la muerte por lisis celular, lo que se observacomo una disminución en el número de células o en la turbidez después de que se agrega dicha sustancia. Los bacteriolíticos que inhiben la síntesis de la pared celular, como la Penicilina y Cicloserina, así como los agentes que actúan sobre la membrana celular, como la Polimixina.
Debido al gran aumento de antibióticos usados en quimioterapia ha surgido un problema aun mayor que la enfermedad, y...