Aplicación De Gfat Como Nuevo Marcador De Selección Para Mediar La Expresión De Genes

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Aplicación de GFAT como nuevo marcador de selección para mediar la expresión de genes
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Resumen
La enzima glutamina: fructosa-6-fosfato aminotransferasa (GFAT), también conocida como la sintasa de glucosamina (GLM), cataliza la formación deglucosamina-6-fosfato de la fructosa-6-fosfato y es la primera enzima y limitante de la hexosamina biosintética.Por primera vez, el gen GFAT fue demostrado poseer una función como un marcador de selección eficaz para genéticamente modificados (GM) los microorganismos.Esto fue demostrado por la construcción y el análisis de dos cepas GFAT deficiente, E. coli y S. SΔglm pombe Δgfa1, y la capacidad delgen que codifica GFAT para mediar en la selección del plásmido. El gen gfa1 de la levadura Schizosaccharomyces pombe fue suprimido por KanMX6mediada por la interrupción de genes y el sistema de eliminación de Cre-loxP marcador, y el gen Sglm de Escherichia coli se ha eliminado mediante el uso de λ-sistema Red recombinado mediada.Tanto E. coli y S. S Δglm Δgfa1 pombe no pudo crecer normalmente enlos medios de comunicación, sin adición de glucosamina. Sin embargo, la deficiencia se complementó con la transformación de los plásmidos que expresaban genes GFAT. El gen que codifica la xilanasa, xynA2 de Thermomyces lanuginosus se ha expresado y secretado por el uso GFAT como marcador de selección en S.pombe. Óptima la concentración de la glucosamina para E. coli y S. S Δglm pombeΔgfa1 crecimiento se determinó respectivamente. Estos resultados proporcionan una técnica eficaz para la construcción de las bacterias GM sin un marcador de resistencia a los antibióticos y la construcción de levaduras GM que se aplicará a los medios de comunicación complejos.
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Introducción 
La ingeniería genética ha sido la tecnología más revolucionaria en lasúltimas décadas, y ha tenido un profundo impacto en la modificación genética de microorganismos para la producción de alimentos, medicamentos biofarmacéuticos, el desarrollo de vacunas y la remediación del medio ambiente [1] . El establecimiento de adecuados los genes marcadores de selección (SMG) ha sido uno de los temas candentes en el campo porque es esencial para la identificación y selecciónde células transformadas por el gen heterogénea (s), y también es con frecuencia necesaria para mantener la propiedad modificada en el crecimiento de las células de organismos genéticamente modificados (GM) los microbios.

Metralletas actuales que han sido ampliamente utilizados en la ingeniería microbios son metralletas y subfusiles auxotróficos antibióticos. En la ingeniería genética de lasbacterias como la Escherichia coli, Bacillus spp. y Lactobacillus spp., la selección y mantenimiento de las células recombinantes es altamente dependiente de metralletas antibióticos. Estos subfusiles tienen la ventaja de ser cómodo y eficiente en la construcción de cepas recombinantes en el laboratorio y la producción de proteínas recombinantes en fermentadores. Metralletas auxotróficos hanutilizado con éxito en la ingeniería genética de levaduras y hongos filamentosos, por ejemplo, los genes, como ura4, his3, his7, CAN1 yLYS2 se han aplicado con éxito a las cepas autotróficas de levadura Schizosaccharomyces pombe [2] -[6] . En condiciones de laboratorio, cuando un solo gen relacionado con la biosíntesis de aminoácidos o nucleótidos se desertó, las células autotróficas no puede crecer en unmedio selectivo que no contiene compuesto correspondiente, a menos que sean transformadas por ADN recombinante para complementar el gen deficiente.

A medida que el crecimiento rápido de la aplicación de microorganismos modificados genéticamente en una amplia área de la biotecnología, el desarrollo de las metralletas de bio-seguridad y eficiencia se ha convertido en una misión importante...