Articulo bioquimica

CABRERA R. & WASSERMAN M.: UTILIZACIÓN DE TÉCNICAS BIOQUÍMICAS EN COMBINACIÓN PARA. . .

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QUÍMICA

UTILIZACIÓN DE TÉCNICAS BIOQUÍMICAS EN COMBINACIÓN PARA LA DETECCIÓN DE PROTEÍNAS DE UNIÓN A CALCIO EN PLASMODIUM FALCIPARUM
por Rodrigo Cabrera1 & Moisés Wasserman2 Resumen
Cabrera R. & Wasserman M.: Utilización de técnicas bioquímicas en combinación para la detección de proteínas deunión a calcio en plasmodium falciparum. Rev. Acad. Colomb. Cienc. 27(102): 125-131. 2003. ISSN 0370-3908. El calcio juega un papel fundamental durante el desarrollo del parásito intracelular Plasmodium falciparum, agente causante de la malaria. Con el objeto de entender mejor el mecanismo como actúa el calcio en este parásito, se detectaron proteínas de unión a calcio en este organismo. El usocombinando del colorante metacromático «Stains-all» y la técnica de 45Ca 2+ overlay permitió detectar 9 proteínas de unión a calcio, 6 de las cuales no parecen corresponder a proteínas previamente identificadas, en parásitos maduros. Adicionalmente se determinó que el uso de estas técnicas es un ensayo que puede ser usado durante la detección y purificación de proteínas de unión a calcio. Palabrasclave: Plasmodium falciparum, Proteínas de unión a calcio, «Stains-all», 45Ca Overlay, PfERC, PfSub-1, Calmodulina, Calcio.

Abstract
Calcium plays a fundamental role in the development of Plasmodium falciparum, the intracellular parasite that causes malaria. With the purpose of understanding the mechanism by which calcium acts in this parasite, Calcium-binding proteins were detected in thisorganism. The combined use of

1. 2.

Universidad de los Andes. Correo electrónico: rodrigocabrera_@hotmail.com Laboratorio de Bioquímica. Instituto Nacional de Salud y Laboratorio de Investigaciones Básicas en Bioquímica LIBBIQ. Departamento de Química, Facultad de Ciencias. Universidad Nacional de Colombia. Correo electrónico: mwasser@ciencias.unal.edu.co

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REV. ACAD. COLOMB. CIENC.:VOLUMEN XXVII, NÚMERO 102-MARZO DE 2003

the metachromatic dye “Stains-all” and the 45Ca Overlay assay allowed the identification, in mature parasites, of 9 calcium-binding proteins, 6 of which seem to be different from any reported calciumbinding protein. Additionally, it was determined that the combined use of these techniques can be useful for the detection and purification of calcium-bindingproteins. Key words: Plasmodium falciparum, Calcium-binding proteins, “Stains-all”, PfERC, PfSub-1, Calmodulin, Calcium.
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Ca Overlay,

Introducción El ión calcio (Ca 2+ ) es un importante mensajero intracelular en organismos eucariotas. La concentración citoplasmática de este ión es alterada súbitamente por diferentes estímulos, y, al hacerlo, genera una variedad de respuestas. Entre losmúltiples eventos mediados por Ca2+ algunos ejemplos son la conducción de estímulos nerviosos, la división celular y la coagulación de la sangre, todos eventos repentinos inducidos por diferentes señales. Los eventos celulares mediados por Ca 2+ son modulados por proteínas con diversas estructuras y funciones que son capaces de unirse físicamente al ión, y al hacerlo, generar una respuesta (BerridgeMJ et al. 2000). Aunque el principal receptor de calcio en las células es la calmodulina, existe un gran número de proteínas que unen calcio. El papel del calcio en el desarrollo de Plasmodium falciparum, el parásito causante de la forma más severa y ampliamente distribuida de malaria, ha sido estudiado con bastante intensidad en los últimos veinte años, y se ha concluido que tiene un rolfundamental en su desarrollo (Krungkrai, J et al. 1982; Tanabe, K et al. 1982; Tanabe, K et al. 1988). Se ha demostrado que en el ciclo asexual del parásito existen eventos de señalización mediados por Ca2+ que son indispensables para su desarrollo. Específicamente, se ha visto que la ausencia de Ca2+ impide la invasión de eritrocitos por parte del parásito, e interrumpe su desarrollo 16 a 20 horas...