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INFORME DE LABORATORIO N°5
Título del Trabajo Práctico: Efecto del pH y temperatura en la catálisis enzimática
Asignatura: Bioquímica
Nombre Autores: .
Nombre del Docente: Tomás Soto.
Ayudante: Sebastián Ramírez.
Fecha: 20/5/2013

Introducción:
Los agentes que provocan la desnaturalización de una proteína se llaman agentes desnaturalizantes. Se distinguen agentes físicos (calor) yquímicos (detergentes, disolventes orgánicos, pH, fuerza iónica).Como en algunos casos el fenómeno de la desnaturalización es reversible, es posible precipitar proteínas de manera selectiva mediante cambios en la polaridad del disolvente, la fuerza iónica, el pH y la temperatura(1)
Cuando sometemos a una enzima como la amilasa salival a cambios extremos de pH y temperatura, cuando su pH óptimo detrabajo es cercano a 7 y su temperatura óptima 37 C (2), esta se desactiva y degregada. Cuando se ha desnaturado una enzima se pierde la estructura natural junto con muchas otras propiedades específicas.
Para medir la actividad enzimática de la amilasa, se utilizará un test colorimétrico que detecta el almidón. Para ello se contará con una solución de Yodo/ioduro de potasio (lugol), ya que elalmidón en presencia de esta solución adquiere una coloración morada característica.
El objetivo principal de este laboratorio es conocer los factores que varían la eficacia de la enzima amilasa salival, para dejar demostrado la importancia de la temperatura y el pH para su óptima actividad.

Objetivos:
Conocer agentes desnaturantes de enzimas.
Conocer procedimientos para determinar laactividad de una enzima en muestras biológicas.
Determinar las variaciones provocadas por el efecto de pH y temperatura sobre la actividad enzimática de la Amilasa salival.
Procedimiento:
En la primera actividad se utilizan 5 tubos donde es agregado en cada uno de estos 2 mL de buffer a un pH 7, también es agregado 2 mL de almidón al tener los tubos con dicha solución se pre incuban durante 5 min, eltubo número uno a una temperatura de 4°C, el numero dos a temperatura ambiente (20°C) el tubo número 3 y 4 a una temperatura de 37°C y el tubo número 5 a 100°C, luego sin ser retirados de sus temperaturas actuales se les agregó a cada uno 2 mL de la enzima amilasa salival exceptuando al tubo número 4 que se le agregó 2 mL de una solución de NaCl, luego se incubaron durante 15 minutos y se retirólos 5 tubos de sus temperaturas actuales, el tubo número 5 que estaba a una temperatura de 100°C se enfrió hasta que quedó a temperatura ambiente, se agregó 5 gotas de lugol a cada tubo y se analizó los resultados. Luego de haber finalizado la primera parte, se realizó la determinación de las condiciones óptimas de pH para la acción de la amilasa salival. En la segunda actividad se utilizaron 5tubos, donde a cada tubo se le agregaron 2 mL de diferentes Buffer, el tubo número uno a pH5, el número dos y tres a pH7 y el cuarto y quinto tubo a pH9 luego a cada tubo se le agregó 2 mL de almidón, al tubo número uno, dos y cuatro 2 mL de la enzima amilasa salival y al tubo número tres y cinco 2 mL de una solución de NaCl 0.9%,luego se incubaron durante 15 minutos a temperatura ambiente (20°C),para luego agregar a cada tubo 5 gotas de lugol y analizar los resultados.
Resultados:
Tabla de temperatura: Se puede analizar las cantidades exactas que fueron utilizadas para poder realizar el experimento número 1 y las temperaturas que fueron sometidas cada tubo para su funcionamiento adecuado (ver anexo 1.1)
Tabla de pH: Muestra y permite analizar las cantidades exactas que fueronutilizadas para poder realizar el experimento numero dos con sus diferentes pH y en cual trabaja más óptimamente (ver anexo 1.2)
Tabla de medición de temperatura: Se puede observar que el tubo número cuatro tubo nula actividad enzimática por el hecho de que no posee enzimas en su solución a diferencia del tubo número 3 que posee enzimas, un pH óptimo para funcionar y la temperatura óptima para que...